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内皮抑素的低分子肝素修饰及对兔角膜新生血管的抑制作用.doc


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1 内皮抑素的低分子肝素修饰及对兔角膜新生血管的抑制作用【摘要】目的探讨利用低分子肝素对内皮抑素进行结构修饰,并评价其对角膜新生血管(corneal neovascularization , CNV) 的抑制作用。方法采用化学方法用低分子肝素修饰内皮抑素, 碱烧伤法建立兔角膜新生血管模型, 分别在球结膜下注射低分子肝素化内皮抑素(Ⅰ组)、内皮抑素(Ⅱ组) 和生理盐水( 对照组), 观察新生血管的生长情况。结果成功的利用低分子肝素对内皮抑素进行了结构修饰, 动物实验表明Ⅰ组新生血管的长度、面积、数量、 VEGF 的表达均明显低于其它两组, 差异有统计学意义( )。结论低分子肝素化内皮抑素可有效抑制角膜新生血管的生长, 效果优于内皮抑素。【关键词】低分子肝素内皮抑素修饰角膜新生血管兔 its angiogenesis effects on rabbit corneas Abstract: Objective To investigate the modification of 2 endostatin (ES) with low molecular wEight heparin (LMEH) and its inhibitory effects on corneal neovascularization ( CNV ). Methods ES was modified with LMWH bya chemical method. The V model was made with alkali burning. LMWH 拟 ES(group 1), ES (group 2) and normal saline(control group) were subconjunctivally injected. Results The blood vessel was shorter and smaller in group 1 than in the other two groups() and the expression of VEGF in group 1 was also significantly lower than that of the other two groups(). Conclusions LMWH 拟 ES can effectively inhibit the growth V and is superior to ES. Key words: Low molecular wEIght heparin; Endostatin; Modification; Cornea; Neovascularization; Rabbit 找一种效果更佳的内皮抑素修饰物。 1 资料与方法 材料含内皮抑素基因的重组表达载体工程菌( 山东大学免疫学研究所); LMWH ( 50 ant 拟 FXa u/mg , 中国烟台东诚生化有限公司); 健康成年新西兰白兔 30 只(山东 3 大学动物实验中心) ,体重 ?kg ,雌雄兼有,眼部无异常。 方法 LMWH 对 ES 的化学修饰采用毕赤酵母表达系统, 按照文献[4 ]的方法进行内皮抑素蛋白的表达,分离纯化后得到电泳单点纯的内皮抑素。采用高碘酸氧化法活化 LMWH , 制得 LMWH 活化液,于 pH 、 ?mol/L 的 NaCO- NaHCO3 缓冲液中对内皮抑素进行化学修饰。通过 SDS 拟 PAGE 电泳监测修饰反应过程,比较不同时间点修饰液的自由氨基修饰率、活性保留百分率。测定 ES 及 LMWH 拟ES 在 25? ℃和 37? ℃水浴中的热稳定性。 LMWH 拟ES及ES 对兔角膜碱烧伤后新生血管抑制作用的观察 30 只兔用***( 25?mg/kg ) 及***丙嗪( 25?mg/kg ) 诱导全麻,将浸润 1?min 的 1?mol/L 氢氧化钠滤纸片置于兔右眼角膜中央 30?s , 然后立即用 20?ml BBS 冲洗烧伤区及结膜囊 1?min 建立实验模型。随机将兔分为 3 组,每组 10 只。碱烧伤后第一天,分别在球结膜下注射 50? μ g/ml LMWH 拟 ES (Ⅰ组)、 50? μ g/ml 内 4 皮抑素(Ⅱ组) 和生理盐水( 对照组)各 ?ml , 以后隔日注射 1次,共8次。每天行裂隙灯显微镜观察球结膜、角膜有无充血、水肿及全身状况。并于术后第 4、7、 10、 13天 V 长度, V 生长状态,将其输入计算机使用软件 Image 拟 Pro Plus 进行图像分析。碱烧伤后 16 天用空气栓塞法处死动物, 无菌下取带 2?m m 宽巩膜

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  • 时间2017-05-29