冈田酸诱导SH.doc

1 冈田酸诱导 SH 2 结果 OA 对 SHSY5Y 细胞形态的影响 OA 未孵育时(0 h) 细胞铺展良好, 突起多而粗大, 胞体呈多角形或不规则形。 OA 孵育 6h后, 少量细胞胞体开始变圆, 突起回缩;18 h后, 大部分细胞胞体变圆, 突起回缩甚至消失;48 h后, 多数细胞呈悬浮生长, 胞体变圆, 突起消失, 部分细胞死亡(图 1) 。随 OA 孵育时间增加,SHSY5Y 细胞呈进行性损伤变性。 OA 对 SHSY5Y 细胞 tau 蛋白磷酸化的影响对照组 Ser396 位点磷酸化 tau 蛋白水平在观测时间点未见变化, 模型组 Ser39 6 位点磷酸化 tau 蛋白水平与所得比值见图 2。 40 nmol/L OA 作用于细胞,Ser396 位点磷酸化 tau 蛋白在 3h 开始升高,18 h 达高峰, 之后下降,48 h 低于基础水平,β actin 蛋白水平保持不变。 OA 可诱导 SHSY5Y 细胞后 tau 蛋白磷酸化程度先升高后降低。 2 PTEN 蛋白水平在 OA 诱导 SHSY5Y 细胞 tau 蛋白过度磷酸化中的变化对照组 PTEN 蛋白和 Ser396 位点磷酸化 tau 蛋白在观测时间点未见变化; 模型组 PTE N和 Ser39 6 位点磷酸化 tau蛋白的变化及所得比值见图 2。 40 nmol/L OA 孵育细胞,Ser39 6 位点磷酸化 tau 蛋白在3h 开始升高,18 h 达高峰, 之后下降,48 h 低于基础水平;而 PTEN 蛋白于 3h 开始升高,6h 达高峰,之后下降,18 h 后低于基础水平。在 OA 诱导 SHSY5Y 细胞过程中,PTEN 蛋白水平存在着变化, 呈急剧上升随后降低的趋势。 3 讨论 AD 样细胞研究模型的选择 OA 是一种蛋白磷酸酶抑制剂, 可抑制磷酸酶的活性,使 tau 蛋白高度磷酸化[8] 。 SHSY5Y 细胞具有神经元的形态特点,且 tau 蛋白含量较高, 调节 tau 蛋白磷酸化的蛋白激酶和蛋白磷酸酶的含量也较高[9] 。体内外实验表明,OA 能诱导 tau 蛋白发生磷酸化, 可用于建立研究 AD 的细胞模型[1012] 。笔 3 者采用 40 nmol/L OA 作用于 SHSY5Y 细胞可引起细胞形态的改变, 并可诱导 tau 蛋白磷酸化,与文献报道相吻合[10,13] 。 AD 样细胞研究模型的发生发展为便于分析 AD 发生发展中 PTEN 蛋白水平的变化, 根据细胞形态及磷酸化 tau 蛋白的改变, 笔者试将 OA 诱导的 AD 样发生发展过程进行分期。 OA 处理 SHSY5Y 细胞 6h 形态未见明显改变, 但磷酸化 tau 蛋白于 3h 开始升高,6h进一步升高, 试将此 6h 时间点作为反映本实验性 AD 诱导期;OA 处理 SHSY5Y 细胞 18h 形态明显改变, 且磷酸化 tau 蛋白达高峰, 此时间点作为反映实验性 AD 形成期;OA 处理 SHSY5Y 细胞 48h 出现明显死亡现象, 此时间点反映实验性 AD 终末期。 AD 样细胞研究模型发生发展中 PTEN 的变化及其可能机制 PTE N 可特异性裂解 PI3 K 的产物 PtdIns(3,4,5)P 3的D3 磷酸基, 使其转变成