4 实验三 石蜡切片技术-取材、固定..doc

石蜡切片法
q 以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法。
q 在研究植物细胞、组织、胚胎以及形态等方面最理想的制片方法。
显微切片技术产生的原因
§1、光学显微镜发展到一定程度,渴望知道细胞结构
§2、由于组织太厚,光线很难穿过
§3、压片可使组织变薄,但引起变形、易位,除核外,看不到其他结构,因此需要切片变薄。
§4、因细胞水多,太软,无法切片
鉴于上述情况找到一种方法使细胞水被替代,变硬,能直接切片的方法,最广泛使用的就是石蜡切片技术
石蜡切片技术的优点
l1、经济,价格低,可反复使用;
l2、技术难度不大,容易掌握,但要精通也不容易;
l3、设备要求不高;
l4、可长期保存;
l5、染色容易,而且都能被染色,形成好的反差和好的选择性。
石蜡切片法步骤
一、取材
二、固定
三、抽气
四、冲洗
五、脱水
六、透明
七、浸蜡与包埋
八、切片
九、染料与染色材料的选择、采集与分割
十、封藏
Ø取样前应注意的问题
,应选择健全而具有代表性的部位取材;
采取病理材料时,除取其病变的部位外,还应从病变的中央部分向四周,连同正常组织一起采取,以利观察分析。
,要根据制片的要求,选择并配制固定液,取材后应立即投入固定液,以防组
织自溶和***。
选材
q 植物材料的切取:
根、茎类轴性器官的切取:
1、横切面:观察各种组织的横切面,及其所占比例。垂直于长轴方向切取。
2、纵切面:观察各种组织的纵切面,平行于长轴方向切取。
分为:径向切面和切向切面。
选材
q 叶的切取:横切面。
,刀必须锐利,动作要快但要仔细,切割时切勿拉锯式的来回切取,镊取时须轻夹轻放,尽量不损伤材料。
,并切成所需的大小。这样有利于固定液的透入。
、采集地点、标本
名称、时期、取材部位、断面和固定液等。Ø
样品采集与分割
1、叶
取样部位
取样部位玉米叶
2、根
主根
侧根
不定根
一级侧根
二级侧根根尖
分区根的初生构造
有丝分裂、核型分析
3、茎
4、花Ø
花药的发育孢原细胞
Ø胚囊的发育单核胚囊第一次有丝分裂二核胚囊第二次有丝分裂四核胚囊八核胚囊Ø
植物材料的分割取材
q根据不同的实验目的,选择相应的材料,材料要求新鲜、准确、完整,材料要避免挤压、挫伤、干枯。
q所采集材料应立即放入固定剂,并编号,注明采集时间、地点、名称、组织部位,所取组织块要大小适当,即要能说明问题,又要考虑固定剂的穿透能力。
q一般组织学取材稍大,细胞学取材稍小,植物组织取材稍小,动物组织取材要稍大。
动物的麻醉和杀死
从活的动物体上采取材料不象采集植物材料那么容易,因为在不施加麻醉的情况下,有的动物会收缩(如蚯蚓、水蛭),有的会骚动(如蛙、鼠),使我们无法下手。但制片所需的材料又要求越新鲜越好,尤其是细胞学方面的研究对材料的新鲜程度要求更严。因此,要割取生活着的动物组织,在一般情况下,就要对动物施行麻醉,然后再割取材料加以固定。但是,所用的***品,必须以不影响细胞结构为原则。若是一般的组织学制片,要求不太严格的话则可将动物先杀死然后速取其组织进行固定