色谱4-TLC[1].ppt

第四章
薄层色谱法
7/24/2017
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概述
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书,推动了这一技术的发展。
因TLC法设备简单,分析速度快,分离效率高,结果直观,很快被用作定性和半定量的方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪,和各步操作的仪器化,并实现了计算机化。
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薄层色谱与高效液相色谱的差别(特点)
固定相和流动相
TLC——流动相流动靠毛细作用力,流动相选择较少受限制,固定相不用再生。而 HPLC是在封闭的系统内,流动相流量靠泵控制,溶剂选择受检测器限制,固定相需再生。
样品处理
TLC要求没有HPLC严格。
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色谱分离
TLC可同时分离多个样品,并可采用相同或不同溶剂进行同向或双相多次展开,通常采用正相色谱,色谱后衍生化方便。
HPLC一次只能分离一个样品,通常采用反相色谱,色谱后衍生化受限制。
对污染物抗受力强
TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物质均无影响。
HPLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物质均有大的影响。
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薄层色谱系统
薄层板
未改性固定相
硅胶—为使用最广泛的薄层材料
氧化铝—有碱性、中性、酸性
硅藻土—为化学中性吸附剂
纤维素—天然多糖类
聚酰***—为特殊类型有机薄层材料,对能形成氢键的物质有特别的选择性。
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表面改性固定相
疏水改性硅胶——化学键合烷基
亲水改性硅胶——引入氨基、***基、二羟基等,薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性剂之间(极性次序:硅胶﹥氨基﹥***基﹥二羟基﹥反相)。
表面改性纤维素——乙酰化纤维素
药典收载的固定相有:硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一般要求10 – 40 um。
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载板——玻璃板,放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时,除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净,干燥,置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。
黏结剂
无机黏结剂——石膏(硫酸钙),添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表示。无机黏结剂的优点是:耐高温,耐酸碱,但涂铺薄板动作要快,否则匀浆易凝固。薄层强度差。
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有机黏结剂——羧***纤维素钠(CMC)、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便,但不能用浓硫酸作显色剂。
荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指示剂,常用的荧光指示剂
在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。
在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。
含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示,并以下标注明其激发光波长。例硅胶HF254
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薄层板涂铺要求:均匀、平整、无气泡引起的凹坑和龟裂。例:
硅胶板(粒度10 ~40um)
硅胶G——将硅胶置研钵中,加入少量水,研磨均匀,至无结块和气泡,再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水),迅速研磨均匀,立即涂铺。
硅胶或硅胶G ——以CMC为黏合剂。% ~ %CMC水溶液,放置过夜,使悬浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀浆。
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反相薄层板制备——以不同链长的正构烷烃为固定液, 配制成适当浓度的溶液(如5%硅***油***溶液), 浸渍硅胶板。
薄层板活化
涂布后的薄层先在室温下阴干,在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化,然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同,如:
硅胶 110℃ 1h
氧化铝 110℃ 30min
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