第四章水草脱毒苗.ppt

第四章水草脱毒苗培育及种质资源的离体保存
水草脱毒苗培育
种质资源的离体保存
第一节水草脱毒苗培育
植物病毒病原体可通过维管束传导。因此,对无性繁殖的植物来说,一旦感染上病毒之后,就会代代相传越趋严重。
受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大幅度下降,品质变劣,甚至完全丧失商品价值。
“脱毒苗”
是指不含该种植物的主要危害病毒,即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。要脱除植株体内所有病毒包括未知病毒是不可能的。
脱苗可通过群体中未受病毒侵染的植株无性繁殖获得。由于病毒不经种子传播(豆科种子除外),因而也可通过种子繁殖获得无病毒植株。
(一)茎尖培养脱毒
(二)热处理脱毒
(三)热处理结合茎尖培养脱毒

(四)其他脱毒方法
一、脱毒方法
1、通过茎尖培养脱毒的原理
(1)病毒在植物体内的分布
茎尖、根尖分生组织不含病毒粒子或病毒浓度很低。是因为病毒在寄主植物体内随维管系统(筛管),病毒运动困难。
病毒在寄主茎尖分生组织中的转移速度落后于茎(根)尖的生长速度,导致顶端分生组织附近病毒浓度低,培养便可获得无病毒再生植株。
(一)茎尖培养脱毒
(2)茎尖大小与脱毒效果
用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点,;通常是带1~3个叶原基的茎尖(~)。
茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过小,外植体离体培养存活困难,生长缓慢,操作难度大。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素,而分生组织以下的1~3个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而带叶原基的茎尖生长快,成苗率高。但茎尖外植体过大,脱毒效果差。
:用于脱毒的植株应是患病群体中病害相对较轻的植株。可直接从选定的植株上取梢段进行消毒接种。也可从室内培养1~2月并进行热处理的盆栽扦插苗上,采顶芽与侧芽消毒接种。
:剪取梢段(也可用侧芽)3~5cm,剥去大叶片,用自来水冲洗干净,在75%酒精中浸泡 30s左右,用1%~ 3%次***酸钠或 5%~7%的漂白粉溶液消毒10~20min(或用 %HgCl2消毒数分钟),最后用无菌水冲洗材料 4~5次。
2、茎尖脱毒的方法
(3)剥取茎尖与接种
在超净工作台上,将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养皿中(已灭菌)。在双筒解剖镜下,用解剖针或镊子将材料固定于视野中,用解剖刀尖仔细剥去幼叶,至出现裸露的生长点。用刀尖切下带1~2个叶原基的生长点(~)。用解剖针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上(顶部向上),每管接1~2个茎尖。
为防止茎尖失水,可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时更换滤纸和接种工具,剥取茎尖时切勿损伤生长点。
(4)培养
接种后材料置 252℃,光照度 1500~5000lx,每日光照10~16h条件下培养。温度对茎尖培养的影响不及光照。不同植物茎尖培养适宜的光强与光照时间不同,但一般光照培养比暗培养效果好。
培养两个月左右,大的茎尖再生出绿芽,小的(~)茎尖则需3个月以上,有的甚至更长时间才发生绿芽。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度,可形成大量丛生芽。
(5)生根诱导
一些植物茎尖培养形成绿芽后,基部很快发生不定根。而另一些植物不产生不定根,必须将无根绿苗再诱导才能生根成为完整植株。诱导生根的方法是将2~3cm高的无根苗转入生根培养基,继续培养1~2个月即可形成根。一些植物茎尖离体培养极难生根,即使转入生根培养基诱导也难奏效(如桃、苹果),这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖(可大于第一次切取的茎尖),再培养,即二次茎尖培养脱毒率可达 100%。