金克对乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长转移和凋亡的影响.doc

金克对乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长转移和凋亡的影响.doc金克对乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长转移和凋亡的影响
【摘要】[目的] 观察金克(槐耳清膏)对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。[ 方法] 以MCF?鄄7细胞复制裸鼠异种乳腺癌移植瘤模型,30只BALB/c荷瘤鼠随机分为对照组(15只)、金克组(15只)。分别用生理盐水()和金克()连续灌胃30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠瘤体大小和生存时间的影响。采用光镜、Tunel法行原位凋亡检测、流式细胞术观察肿瘤凋亡的形态学变化。[结果] ①金克组肿瘤体积大小明显小于对照组(±,±,P<);②金克组生存期为明显长于对照组(±,±,P<);③原位凋亡检测移植瘤细胞凋亡指数(AI)明显金克组高于对照组,差异有显著性(% vs %,P<);④流式细胞术显示金克组凋亡比例与对照组差异有显著性(% vs %,P<)。[结论] 金克可抑制人乳腺癌细胞MCF?鄄7移植瘤生长,延长生存期。
【关键词】金克乳腺肿瘤移植瘤凋亡
金克—槐耳颗粒具有良好的促凋亡效果和免疫增强调节作用,无明显毒副作用。对肝癌、肺癌、食管癌、胃癌等均有独特疗效[1]。本文主要观察金克对乳腺肿瘤生长的抑制作用,对肿瘤细胞凋亡的影响。
1 材料与方法
材料
金克(槐耳清膏)由江苏启东盖天力药业有限公司提供。人乳腺癌细胞株MCF?鄄7购于上海生命科学院。细胞培养于含血清培养液中,呈贴壁生长。培养细胞置于37℃、5%CO2培养箱中,每3~5天传代1次。实验动物:健康雌性纯种裸鼠,4~6周龄,体重12g~20g,购自湖北省实验动物研究中心(合格证号:SCXK(鄂)2003?鄄0005),饲养于华中科技大学同济医学院实验动物中心。裸鼠置于恒温层流箱中,于无特定病原体(SPF)环境下饲养,12h光照和12h黑夜交替。喂养符合卫生部颁布的“医学实验动物全价营养饲料标准”。
方法
人乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的建立:人乳腺癌细胞株MCF?鄄7在含10%的胎牛血清及160U/L胰岛素的RPMI?鄄1640培养液中培养,传代扩增,收集对数生长期细胞制备悬液,活细胞浓度为1×107/ml。台盼蓝染色计数活细胞占95%以上。SPF环境下进行实验操作,(
×107个)[2,3]。
动物分组及用药:接种4周后,将裸鼠随机分为对照组和金克组。①对照组:15只,采用灌胃法给药,%,共30d。②金克组 15只,,其浓度为150mg/ml,共30d。金克组药物剂量相当于人体正常服用金克剂量根据体表面积比值进行换算折合成裸鼠的剂量[4]。
移植瘤生长情况及药物抑瘤效果:给药后每隔3d用游标卡尺测量肿瘤最大长径(a)、横径(b)。计算移植瘤的体积=(a×b2)/2[5],绘制移植瘤生长曲线。
移植瘤组织病理学观察:取移植瘤用4%多聚甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片、HE染色,光镜观察。
裸鼠主要脏器组织学观察:将裸鼠的肝、肺固定,石蜡包埋、切片、HE