针刺对肥胖模型大鼠中胰岛素和胰岛素底物表达的影响.doc

针刺对肥胖模型大鼠中胰岛素和胰岛素底物表达的影响.doc针刺对肥胖模型大鼠中胰岛素和胰岛素底物表达的影响
作者:龚美蓉,徐斌,毛珍,邵清华,孙永
【摘要】目的观察针刺对肥胖大鼠血清胰岛素含量和胰岛组织胰岛素受体底物1,2(IRS-1,IRS-2)表达的影响,探讨针刺对高脂饮食性肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响。方法采用实时定量PCR技术测定胰岛素受体底物1,2(IRS-1,IRS-2)基因表达水平, 酶联免疫测定法测定血清中胰岛素的含量,生化比色法测定血清葡萄糖含量。结果针刺治疗取得良好减肥疗效的同时,肥胖大鼠血清中葡萄糖及胰岛素水平明显回降,而胰岛组织胰岛素受体底物1(IRS-1)基因表达水平却明显升高。结论针刺可改善肥胖大鼠胰岛素信号转导,减轻胰岛素抵抗。
【关键词】胰岛素抵抗; 肥胖; 大鼠; 胰岛素受体底物
肥胖已成为现代生活的流行病,其发病过程复杂,危害严重[1,2],对肥胖的研究已成为21世纪科学研究的迫切任务。有研究表明肥胖大鼠血中胰岛素(INS)含量异常升高,肥胖机体具有高胰岛素血症,这些结果证明了肥胖机体存在着胰岛素抵抗(IR)[3~5]。本研究应用酶联免疫测定法和实时定量PCR技术观察针刺治疗前后肥胖大鼠血中胰岛素的含量以及胰岛IRS-1和IRS-2基因表达的水平,以探讨针刺对单纯性肥胖致胰岛素抵抗的影响及其可能的作用机制。
1 材料
设计:随机对照动物实验。
时间及地点:实验于2006-10~2007-01在南京中医药大学动物实验中心、江苏省针灸学重点实验室(BSL-3)完成。
材料:刚断乳的健康清洁级雄性SD大鼠90只,体质量50~70g, 由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供(动物许可证号:SCXK(沪)2003-0002)。仪器和试剂:韩氏LH402A穴位神经电刺激仪,UV-754分光光度计(上海第三分析仪器厂),DG5031酶联免疫检测仪(华东电子管厂),基因扩增仪MJ-mini(BIO-RAD公司),实时定量PCR仪Mx3000P(Stratagene公司),血清葡萄糖试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司),血清胰岛素Elisa试剂盒(批号:ADL原装 96T Elisa),总RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen 公司),反转录试剂盒M-MLV(Promega 公司),SYBR Green Ⅰ(Stratagene公司)。
2 方法
单纯性肥胖大鼠模型的制作选用刚断乳的健康清洁级SD雄性大鼠90只,体质量50~70 g, 由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。参照刘氏提供的实验性肥胖造模方法[6]改进,大鼠适应饲养1周后,随机挑选10只,用普通饲料喂养,称正常组。另一组80只,用由苏州双狮实验动物饲料有限公司提供的高脂致肥饲料喂养,称高脂组,分组时两组大鼠体重无差异。以体重超过普通饲料组10%为肥胖标准,4个月后,造模成功30只。
动物分组造模后,将获得的肥胖大鼠30只随机分为肥胖模型组和针刺
组,每组各15只。
治疗方法针刺组:将大鼠捆绑于自制的固定器中,用环球牌32号无菌针灸针针刺一侧“足三里”穴和“内庭”穴,左右侧隔日交替轮换取穴。施平补平泻手法后,“足三里”穴、“中脘”穴连接韩氏LH402A穴位神经电刺激仪,频率2/15 Hz,强度2mA,治疗时间15 min/d,每6 d休息1 d,共观