针刺对胶原性关节炎Cx43基因敲除鼠血清TNF.doc

针刺对胶原性关节炎Cx43基因敲除鼠血清TNF.doc针刺对胶原性关节炎Cx43基因敲除鼠血清TNF
作者:颜灿群, 占克斌, 黄光英, 王伟
【摘要】目的探讨针刺对胶原性关节炎(Ⅱcollagen-induced arthritis,CIA)模型Cx43基因敲除小鼠治疗作用的途径及分子机制。方法用牛Ⅱ型胶原免疫野生型(Cx43+/+)及杂合型(Cx43+/-)小鼠,诱导关节炎建立CIA模型,初次免疫后第3周开始针刺治疗,观察其发病程度及外周血血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化。结果针刺降低Cx43+/+ CIA小鼠关节炎指数和外周血TNF-α比Cx43+/- CIA小鼠明显(P<)。结论针刺疗效与Cx43有关,通过缝隙连接蛋白起作用;抑制胶原性关节炎小鼠血清中的TNF-α;可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一。
【关键词】针刺; Cx43; Ⅱ型胶原性关节炎; 肿瘤坏死因子-α
Abstract:ObjectiveTo explore the therapeutic effect of acupuncture collagen-induced arthritis(CIA) in Cx43 knockout (Cx43+/-) and ice ouse model. Acupuncture the third e time, arthritis score and onset of arthritis ent TNF-α level ined. ResultsThe results shoice is associated ain mechanism of acupuncture to treat RA.
Key atoid Arthritis,RA)的有效性,尤其是对关节疼痛的缓解和炎症的控制。近年来越来越多的实验研究和临床研究显示针灸能调节RA患者和模型动物的免疫和内分泌功能、改善血循环等[1]。前期的研究显示缝隙连接蛋白(Cx43)与经络有着高度的相关性[2~4]。本研究通过观察针刺对Cx43+/-和Cx43+/+ CIA小鼠的关节炎指数和血清中TNF-α的变化,在分子水平上探讨针刺在Cx43 CIA小鼠治疗作用中的途径和可能机制。
1 材料与仪器
动物及饲养条件Cx43基因敲除杂合型B6;129S-GjaltmlKdr/J小鼠(Cx43+/-) 从美国Jackson Laboratory购买,在其子鼠出生后第21天利用PCR技术进行基因类型鉴定。将产生的Cx43+/-和Cx43+/+小鼠作为研究对象,选择8~10周龄的雄性小鼠。均在无菌条件(specific pathogen free,SPF)下饲养。
试剂牛Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ,CⅡ)、完全弗氏佐剂(plete Freund's adjuvant,CFA)购自美国Chondrex公司,TNF-α试剂盒购自深圳晶美公司。
仪器酶标仪ELX800型,Bio-tek,美国产。
2 方法
CIA小鼠模型的制备液态的CⅡ与CFA等体积混合,充分乳化,对Cx43+/-和Cx43+/+小鼠进行造模。首次免疫在小鼠尾部距尾基部2~( C
Ⅱ