针刺对脑缺血再灌注模型大鼠海马 caspase3 mRNA 表达的影响.doc

针刺对脑缺血再灌注模型大鼠海马 caspase3 mRNA 表达的影响.doc针刺对脑缺血再灌注模型大鼠海马 caspase3 mRNA 表达的影响
作者:冉群芳,倪光夏,项晓人
【摘要】目的:探讨针刺对脑缺血再灌注大鼠脑组织保护作用的机制。方法: 参考 Bederson6级5分法进行神经功能评分和用原位杂交技术检测脑缺血再灌注24h后大鼠海马caspase3 mRNA的表达。结果:穴位针刺组较非穴位针刺组和模型组更显著的改善大鼠缺损的神经功能(P<)。穴位针刺可以下调脑缺血再灌注大鼠海马caspase3 mRNA的表达,与模型组、非穴组相比,差异有显著性(P<)。结论:针刺能够改善脑缺血再灌注后大鼠的神经功能损伤,其作用机制可能是通过下调caspase3的表达,抑制凋亡实现的。
【关键词】针刺;脑缺血;模型,动物;caspase3 mRNA;原位杂交技术;大鼠;半胱氨酸蛋白酶类
1 材料和方法
实验动物选择及分组选用中国科学院上海斯莱克实验动物有限公司提供的健康雄性成年SD大鼠50只,体重250±30 g,随机分为正常组、假手术组、模型组、穴位针刺组、非穴位针刺组。
主要试剂及器械 caspase3原位杂交检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司,多聚赖氨酸和DAB显色试剂盒购自福建迈新公司,LEicaTP1020全自动组织处理仪,南京小松医疗仪器研究所生产的XS998B光电治疗仪,北航图像分析系统,华佗牌不锈钢毫针。
模型制备参照Longa(1989年)线栓法并加以改进:SD大鼠用10%水合***醛( mL/100 g体重皮内注射)麻醉,仰卧固定。颈部正中切开皮肤,钝性分离左侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉,仔细分离避免损伤迷走神经。由颈外动脉远心端结扎颈外动脉,用微型动脉夹夹住颈总动脉近心端及颈内动脉,在靠近颈总动脉分叉处用眼科剪在颈外动脉上剪一小口, mm的尼龙钓丝涂有石蜡的一端沿小口插入颈总动脉,剪断颈外动脉远心端,使颈外动脉和颈内动脉处于同一直线上,移去颈内动脉的动脉夹,经颈总动脉分叉处将鱼线缓慢向颈内动脉入颅脑内的方向推进约17-18 mm,微遇阻力时停止,使鱼线头端到达较细的大脑中动脉起始处。缚紧预先放置于穿刺小口处的丝线,缝合,消毒,于缺血2 h后拔出栓线,建立缺血再灌注模型。假手术组大鼠只分离暴露颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉,结扎颈外动脉。正常组不进行手术处理。再灌注2 h后进行神经行为学评分,同时电针治疗。评分标准参考Bederson6级5分法:正常为5级(0分);对侧上肢不能完全伸展为4级(1分);向对侧推时抵抗力下降为3级(2分);提尾时向对侧转圈为2级(3分);自动转圈为1级(4分);无自发性活动、意识障碍为0级(5分)。神经行为学评分达到1-4分视为造模成功。
干预方法穴位针刺组取穴:根据中国针灸学会实验针灸研究会制定的“动物针灸穴位图谱”,取内关(双侧)、人中、百会、风府。
非穴位针刺组取穴: cm处,共5个点。
针刺方法:在模型成功造成缺血再灌注后2 h针刺1次。两组均留针20 min,并通电针仪刺激,选用XS998B光电治疗仪,频率f2,刺激强度以保持针刺局部轻微抖动为度。针具为“华佗牌”不锈钢针,×25毫针。百会平刺,内关、风府直刺,深度均为0.