钙离子对小鼠海帕西啶mRNA表达的影响.doc

钙离子对小鼠海帕西啶mRNA表达的影响.doc钙离子对小鼠海帕西啶mRNA表达的影响
作者:郭晓强肖维富杨勇姚清国
【摘要】目的研究钙离子在海帕西啶表达调节中的作用。方法昆明小鼠被分为4组,分别腹腔注射等渗的NaCl、MgCl2、CaCl2和FeCl3溶液,采集血清和肝脏组织,血清铁和总铁结合力使用试剂盒检测,肝脏海帕西啶mRNA含量使用半定量RTPCR确定。结果和钠离子相比,钙离子可减少血清铁含量(P<),同时抑制海帕西啶mRNA表达(P<)。结论钙离子可通过调节海帕西啶mRNA表达而影响铁代谢。
【关键词】钙离子;海帕西啶;铁代谢
铁是机体生长发育所必需的微量元素,参与生物氧化和DNA复制等生物学过程,然而铁过多可造成生物损伤。海帕西啶(hepcidin)是2000年发现的一种主要在肝脏内表达、具有铁调节功能的小肽〔1〕,可通过诱导小肠上皮细胞或巨噬细胞表面铁输出蛋白(ferroportin1,Fpn1)细胞内吞和降解而达到减少血清铁的目的〔2〕。海帕西啶表达受多种因素影响,如炎症和铁沉积可诱导表达,而贫血和缺氧则抑制其合成〔3〕。一系列研究发现海帕西啶表达还受骨形态发生蛋白(bone morphogeic protEin,BMP)的影响〔4〕,而BMP蛋白参与了骨骼形成过程,而钙离子是骨骼形成的基本离子之一。随着年龄相关的骨质疏松发生率增加的同时铁却出现沉积现象,这一系列结果说明铁内稳态可能与机体钙代谢之间存在密切联系。本实验探索小鼠腹腔注射不同阳离子后检测海帕西啶mRNA表达和血清铁的变化,以确定钙离子对机体铁内稳态的影响。
1 材料与方法
动物与试剂实验用昆明雄性小鼠(清洁级)购自河北省实验动物中心〔合格证号:SCXK(冀)20031003〕,体重20 g左右;RNA提取试剂盒(Trizol试剂盒)、禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶、焦碳的二乙酯(DEPC)等均购自上海生工,其他试剂为国产分析纯。
方法
分组与处理 16只小鼠分为4组,分别腹腔注射等渗的NaCl( mol/L)、MgCl2( mol/L)、CaCl2( mol/L)和FeCl3( mol/L),每日1次,除FeCl3注射1 d(毒性太大,注射过多可导致死亡)外,其他均连续注射1 RNA RTPCR检测将提取的RNA首先测定浓度,利用逆转录获得cDNA,然后对海帕西啶和βactin进行PCR 扩增22 个循环(94℃变性30 s,55℃退火40 s,72℃延伸1 min),%琼脂糖凝胶电泳分离,所得结果用凝胶成像系统扫描并计算吸光度值。实验中所用基因的PCR引物均为上海生工甗物工程技术有限公司合成,其序列分别为:海帕西啶:前向:5
′ATCAACAGATG3′;反向:5′ACACTGGGAA3′;βactin:前向5′3′;反向:5′TTTGAGGTCACGCACGATTT3′。
统计学处理数据资料用x±s表示,海帕西啶和βactin的mRNA相对含量(RTPCR后电泳吸光度比值并选取NaCl组为100)用柱形图显示,。
2 结果
不同离子对小鼠血清铁和总铁结合力的影响相对于NaC