实验24化能异养微生物的分离与纯化.doc

实验6 化能异养微生物的分离与纯化(综合,占6学时)
[目的要求]
、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分离、划线分离等技术。
、纯化出所需菌株。
,了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
。
[基本原理]
土壤是微生物生活的大本营,是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同,一般土壤中细菌数量最多,其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥,偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多;酵母菌在一般土壤中的数量较少,而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌;白面曲(发面用的引子)或酒曲或果园土中分离酵母菌。
为了分离和确保获得某种微生物的单菌落,首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。各类菌的稀释度因菌源、采集样品时的季节、气温等条件而异。其次,应考虑各类微生物的不同特性,避免样品中各类微生物的相互干扰。,分离放线菌时,一般在制备土壤稀释液时添加10%酚或在分离培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌(如加链霉素25-50μg ml以抑制细菌;添加制霉菌素50μg/ml或多菌灵30μ/ml以抑制霉菌);酵母菌和霉菌都喜酸性环境,一般酵母菌只能以糖为碳源,不能直接利用淀粉,酵母菌在pH 5时生长极快。而细菌生长适宜的酸碱度为pH7,所以分离酵母菌时只要选择好适宜的培养基和pH,可降低细菌增殖率,霉菌生长慢,也不干扰酵母菌分离。若分离霉菌,需降低细菌增殖率,一般培养基临用前须添加灭过菌的乳酸或链霉素。为了防止菌丝蔓延干扰菌落计数,分离霉菌时常在培养基中加入化学抑制剂。要想获得某种微生物的纯培养,还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。四大类微生物的分离培养基、培养温度、培养时间见表所示。
(材料与用品)
。铲去表土层2~3cm,取3~10cm深层土壤10g,,并记录取样地点、环境及日期。土样采集后应及时分离,凡不能立即分离的样品,应保存在低温、干燥条件下,尽量减少其中菌种的变化。从面曲中分离酵母菌。也可用酒曲等替代。
、马丁氏培养基、高氏合成一号培养基、豆芽汁葡萄糖培养基(制平板和斜面,
,每瓶装99ml(或95ml分离霉菌用),每瓶内装10粒玻璃珠;分装试管,—5ml(不超过试管高度的1/5)。
、无菌移液管、无菌玻璃涂棒(刮刀)、称量纸、药匙、洗耳球、10%酚溶液。
[实验步骤]
菌株的分离与纯化
平板分离菌有倾注法、涂布法及划线法三种。(本次实验要求的操作包括采用倾注法放线菌,划线法分离细菌、采用涂布法分离霉菌、酵母菌):
1、细菌的分离
1)制备土壤稀释液称取土样1 g,,使土样中菌体、芽孢或孢子均匀分散,制成10—2稀释度的土壤稀释液。然后按10倍稀释法进行稀释分离,以制备10-2稀释度为例,具体操作过程