实验一 细菌的革兰氏染色.doc

实验一_细菌的革兰氏染色实验一细菌的革兰氏染色
生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节
一实验目的
1 学****显微镜油镜的使用方法
2 学****微生物的无菌操作技术
3 学****细菌的革兰氏染色法
二实验原理
1 显微镜及油镜物镜的使用原理
1) 油镜头的标志
油镜头上常刻有OI或 HI字样,有的还刻有一圈红线或黑线标记。在低倍物镜、高被物镜和油镜3种物镜中,油镜的放大倍数和数值孔径最大,而工作距离最短。
2 ) 显微镜的分辨率
显微镜性能主要是看它的分辨率的大小,然后看它的总放大倍数。分瓣率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离(D)的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值与光线的波长(λ)成正比,与物镜的数值孔径(NA)成反比:D=λ/2NA
2 细菌的革兰氏染色原理
。作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色的基本步骤是:先用初染剂结晶紫进行染色,再用碘液媒染,然后用乙醇脱色,最后用复染剂番红复染。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类.
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或***脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经番红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色。
三实验器材
1 菌种:培养24h的枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆营养琼脂菌斜面培养物。
2 染色液和试剂: 生理盐水、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红复染液, 香柏油,显微镜擦拭液.
3器材:酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。
四实验方法
1 涂片: 取一干净载玻片,中央滴一小滴生理盐水,无菌操作取菌
无菌操作(快):在酒精灯上灼烧接种环(注意手势)---松动试管帽---取下试管帽---灼烧管口---在火焰旁接种环通过火焰进入菌种管---接种环在管壁冷却---挑取菌少许---退出---灼烧管口---盖帽---涂片(调匀涂成薄膜)---灼烧接种环.
2 干燥: 室温自然凉干
3 固定: 手执玻片一端,让菌膜朝上,通过火焰2-3次固定(以不烫手为宜).
4 染色: 初染(加草酸铵结晶紫一滴,约一分钟,自来水水洗)---媒染(加碘液冲去残水,并覆盖一分钟,水洗)---脱色(将水甩净,衬以白背景,用95%酒精滴洗至流出的酒精不出现紫色时为止,约20-