元谋栽培印楝枝叶化学成分的研究.doc

元谋栽培印楝枝叶化学成分的研究.doc元谋栽培印楝枝叶化学成分的研究
ok3bin (1)甾体,6-deacetylnimbin (2),6-deacetylnimbinene (3),nimbinene (4),azadiradione(5),7-acetoxy-elema-1,3-dien-8-ol (6),1-naphthalenone (7), acarusnol (8),colvane-2β,9α-diol (9),乌苏酸(10),马斯里酸(11),2α-羟基乌苏酸(12)甾体,猕猴桃酸B (13),2α,3α,4β-trihydroxypregnan-16-one(14),2β,3β,4β-trihydroxypregnan-16-one(15)。
1 材料和方法
材料和仪器
NMR在Bruker AV-400或 DRX-500核磁共振仪上测定,以TMS为内标。ESI质谱由erck公司生产。D101大孔吸附树脂为日本MitsubishiChemical Corporation生产。显色剂为10%硫酸水溶液及碘。
植物来源
印楝(Azadirachta indica)样品于2009年5月采自云南省元谋县杀虫植物印楝栽培基地,系引自缅甸的品种;植物标本由昆明植物研究所彭华研究员鉴定。标本(No. KIB 20090502)存放于昆明植物所植物化学与西部植物资源可持续利用国家重点实验室中国。
提取与分离
自然晾干的印楝枝叶(47 kg)粉碎后,于室温下用甲醇提取4次,每次140 L甲醇提取16小时。合并提取液减压回收溶剂,得到含水的粗提物。将粗提物用乙酸乙酯萃取后浓缩得到1250 g萃取物,将萃取物硅利用硅胶色谱划分为4个极性段,分别是纯***仿段Fr. A(146 g)、50:1***仿–甲醇段Fr. B(497 g)、10:1***仿–甲醇段Fr. C(157 g)及4:1***仿–甲醇段Fr. D(180 g)。Fr. B用D101大孔树脂吸附甾体,20%甲醇水洗脱至流出液基本无色后用80-90%甲醇水洗脱,收集合并80-90%甲醇水洗脱液浓缩蒸干得303 g胶状物,,用7倍量硅胶进行柱层析,用石油醚–***(1:0-1:1)-4。馏分Fr. 1(110 g)先用反相划为3段:55%甲醇水馏分Fr. 1-1、70%甲醇水馏分Fr. 1-2及90%甲醇水馏分Fr. 1-3。再对各段用硅胶柱(200-300目,石油醚–乙酸乙酯、***仿–***或***仿–甲醇梯度洗脱)和凝胶色谱(流动相为甲醇)反复层析,从Fr. 1-1得到化合物1( g),2( g),3(940 mg),4(480 mg)甾体,5(390 mg),从Fr. 1-2得到化合物10( g),从Fr. 1-3得到化合物6(40 mg),7(150 mg),8(95 mg)。Fr. C用大孔树脂吸附,依次用30% 、80%甲醇水及甲醇洗脱,将80%甲醇水洗脱部分合并浓缩得65 g胶状物,:1
–10:1***仿–甲醇系统洗脱,TLC检测合并分为4个馏分Fr. 5-8,对Fr. 7(19 g)反复用反相C-18、凝胶及硅胶柱(***仿–***和***仿–甲醇梯度洗脱)层析