CYP450 3A及其等位基因在体外药物代谢和药物相互作用中的对比分析.pdf

西北大学
硕士学位论文
CYP450 3A及其等位基因在体外药物代谢和药物相互作用中的对
比研究
姓名:李拴美
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:陈超
20090401
回归分析法计算出‰值和‰值,进而得到体外代谢的内在清除率源宋R谰用中的对比研究及其等位基因在体外药物代谢和药物相互作中文摘要方法:在已有的和的野生型模板情况下,利用不对称姆系统中进行表达,差速离心法制备得到微粒体。并用奶匾煨苑从Γ河ü獾孜比较各重组酶的代谢差异。与此同时,使用原生型和各突变株微粒体蛋白在两种检测系结果:酿酒酵母表达体系是酶系理想的体外表达体系。体外酶动力学和药目的:人细胞色素在肝脏中是含有亚铁血红素蛋白的超基因家族。参与大部分药物的代谢过程,也被称为混合功能氧化酶或单加氧酶。蝗衔J人类家族在某些器官中最主要的功能形式。约占肝脏中总含量的%,参与%.%常用药物在体内的代谢转化过程,包括氧化、过氧化或者还原等。和是肝脏和肠道中主要的δ苄问剑淮蟛糠窒嗤牡孜铮ň哂胁同的代谢常数。而且由于这两者在个体中含量的不同,因此可能具有不同的药物代谢能力。亚家族中由于基因、年龄、疾病状态等因素,酶活性之间具有明显的个体差异,不仅表现在肝脏表达水平差异约倍,且个体对药物的体内代谢能力也相差倍左右。其中,基因因素的作用约占%ァD壳埃⑾中矶郈任换蚩能是造成个体间药物代谢差异的一个重要因素。实验目的是:通过体外的对比研究,找的球吧和幸和木,宰,丰等位基因在药物代谢和药物抑的差异,分析其差异性存在的原因。法在野生型基因中引入各等位基因的突变位点,利用酶蚗生插入片段,与含有同样酶切位点的大肠杆菌疌靥褰辛樱缓笞;酱肠杆菌中。通过氨苄青霉素抗性标记筛选出重组子,初步鉴定后,再通过测序确认,无非同义突变后,转化入整合有虻慕湍妇曛校冒肴樘怯盏贾刈樽釉诮湍的去***化和硝苯地平的氧化,进行酶动力学的分析,非线性统中分别对种和忠┪锝猩秆。蟪銎銲担芯恳┪镆种频南嗷プ饔谩物抑制的对比研究中发现:除任换蛎竿猓.,和水,芙獶和硝苯地平代谢成相应的产物,庞捎诨钚约负出
‰‰依次分别是的、种药对、胛和各等位基因酶的抑制程度的排序为:术母U攵阅持忠┪锏丧失因此也无法进行后续的药物抑制实验。在和的对比研究中发现:≥。在两种底物的抑制实验中,两株野生型均能被***康唑强烈的抑制,,对后者的值分别是和A硗药物除了那些对两者都不存在抑制的药物外,,药物对和各等位基因的抑制程度排序为:***康唑地尔硫卓窳型舍曲林撩***西汀蠓隹奥美拉唑烀顾来适可迪亚┞迤普拉固⑵胀华法林蚵辛伐他汀鬟涮嫱 R┪锒詗透鞯任基因酶的抑制程度的排序为:牛R韵醣降仄轿5孜锸保┪锒訵各等位基因的抑制程度排序为:***康唑囟蜃维拉帕米蠓隹西乐葆蚵纾具体抑制情况,嗵韵窒笠廊淮嬖冢掖嬖诿飨缘牡孜镆览迪窒蟆0被崴承虿同或者改变后,酶动力学特征发生明显改变,且对药物抑制的程度也发生了一定变化。结论:等位基因和相比,氨基酸改变后,酶动力学特征与野生型有明显差异,且对药物抑制的程度也发生了改变。此外,本实验成功构建了在酵母表达系统中高效表达刈槊傅姆椒ǎ泶锍龅闹刈槊妇哂谢钚愿摺⑽榷ㄐ院玫忍氐恪M币步起荧光和两种针对于遗传多态性研究的药物筛选平台,为进一步研究的研究奠定了良好的基础,除可以作为一种新药临床前高通量筛选的方法外,而且也有助于推动临床个体化用药的发展。关键词:任换颍┪锎唬┪锵嗷プ饔Ⅱ
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缩略语表唧细胞色素还原酶药物不良反应药物药物相互作用吸收、分布、代谢和排泄高效液相色谱相对荧光单位聚偏二***乙烯滤膜聚丙烯酰***凝胶电泳一三羟***氨基甲烷二***亚砜细胞色素人肝脏微粒体单核苷酸多态性药物代谢酶乙二***四乙酸二***荧光素牛血清白蛋白苯***磺酰***大肠杆菌酵母氮源辣根过氧化物酶光密度美国食品药品监督管理局半数抑制常数聚氧乙烯甜菜碱月桂酸酯千道尔顿眔,,,—匣甤。甋%
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