简析微载体的制备及其原代大鼠肝细胞的培养.pdf

南开大学
硕士学位论文
微载体的制备及其原代大鼠肝细胞的培养
姓名:张立国
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:潘继伦

一篇一厂趣摘要一胞堕垄苄退靠一————————橹罫本文的目的是通过制备性能优良的微载体来提高肝细胞密度和代谢活性,为提高杂化人工肝支持系统在肝功能衰竭治疗中的效率奠定基础。以大鼠的肝脏为肝细胞供体,采用改进的胶原酶原位灌流法对原代肝细得到了形态好、存活率高的原代大鼠肝细胞。一只左右的大鼠以分离出大约龈蜗赴赴婊盥试ヒ陨稀以壳聚糖为材料,合成了粒度适合,性能优良的戊二醛交联的糖修饰的微载体.,另外制备了氧化乳糖交联的壳聚糖微载体。用牛血清培养基进行肝细胞的微载体培养,肝细胞在微载体表面保持良好的球形状态,并且以聚集体的形式存在,这大大提高了肝细胞的密度和代谢活性。肝细胞在果糖修饰的壳聚糖微载体上和氧化乳糖交联的壳聚糖微载体上保持较高的代谢活性,白蛋白最高分泌量分别为./和./。另外,肝细胞在乳糖修饰的壳聚糖微载体上的代谢活性也要强于在拇换钚浴U馑得魅樘呛凸悄芴岣吒蜗赴谖⒃靥迳系以纤维素微材料,合成了性能优良的微载体,并进行了糖基化处理。肝细胞培养结果显示,经过糖基化处理的纤维素微载体有利于细胞的贴附,并能提高细胞的综上所述,糖基化的壳聚糖和纤维素微载体以及氧化乳糖交联的壳聚糖微载体在杂化人工肝支持系统中将会有良好的应用前景。关键词:肝细胞壳聚糖纤维素氧化乳糖微载体细胞培养人工肝在组织工程中代谢活性。、~,●
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第一章前言第二节肝功能衰竭的治疗和人工肝支持系统第一节肝功能肝脏是人体内最大的腺体。***的肝脏重约克。它既可以做为一个外分泌腺分泌胆汁,通过胆道系统把胆汁输入十二指肠,也可以作为内分泌腺合成多种物质,直接释放到血液中去。肝脏中发生的化学反应约有忠陨希谌体中所起的作用是非常重要的,几乎所有的营养物质的代谢需要肝脏的参加:肝脏可以通过糖酵解和糖异生的作用维持血糖的稳定;大部分的氨基酸在肝脏内进行蛋白质的合成、氨基酸的脱氨、转氨等作用;肝脏是很多凝血因子的主要合成场所:肝脏是脂肪运输的枢纽,脂肪可以在肝脏内进行储存、代谢等;肝细胞能不断的生成胆汁酸和分泌胆汁,帮助小肠进行脂类的代谢;肝脏还是人体内主要的解毒器官,它可以将外来的或体内代谢产生的有毒物质处理成无毒的或溶解度大的物质,使其随胆汁或尿液排出体外;健康的肝脏可以发挥免疫调节的作用;来自肠道的大分子抗原可经过淋巴液至肠系膜淋巴结,而小分子抗原则主要经过门脉微血管进肝脏,肝脏中的巨噬细胞可以处理这些物质,经过处理的抗原物质可刺激机体的免疫反应肝脏还有巨大的机能储备能力。动物实验证明,当肝脏被切除%一%后,并不显示出明显的生理紊乱。而且,残余的肝脏可以在大鼠周内生长至原来的大小,生长的速度是惊人的,这称为肝的再生。同样的现象在人体中也可观察到,因此我们可将该性质作为治疗肝衰竭的依据之一Ⅲ。一、肝功能衰竭及治疗由于肝细胞的机能失调或者肝细胞的坏死而导致肝脏丧失一种或多种功能称之南开大学硕士论文第一一章前言
为肝功能衰竭。肝功能衰竭按照病情的发展时间可以分为急性和慢性两种。急性肝衰竭中以爆发性肝衰竭Ⅲ猣最具代表性,由病发发展到肝脑病仅要艿氖奔洌垢蜗赴罅炕邓溃佣贾赂位杳裕艘硌鸩起悖顾和肝脑病变。慢性肝功能衰竭中肝脏一般没有形态学上的突变,是一种渐进式的病变。例如肝硬化,它是由于长期与***缇凭的接触或慢性病毒性肝炎导致纤维组织替代正常肝组织而引发的。慢性肝功能衰竭中,受损伤的肝细胞不能去除含氮的毒性产物,氨的增加可能与病人的精神状态的恶化有关并最后导致“肝昏迷”。肝脑病伴随神经的损伤是慢性肝功能衰竭的标志。实际上慢性肝功能衰竭中的肝脑病常伴随着一系列的出血及感染,更进一步发展为深度昏迷。当人患有重症肝病且肝功能不能自行恢复时,转基因动物的器官虽然提供了一个解决这一问题的方法,但是这一研究仍处于研究发展阶段,现阶段仍需要肝脏移植拯救生命。用于肝移植的器官供体往往缺乏,许多肝衰竭病人在等待组织型合适的供体的过程中死去【俊A硗猓我浦驳囊G蠼涎希矶喔嗡ソ卟∪瞬皇合移植。主要原因是一些病人在进行肝移植以后出现了转移性肝癌、伴发性感染、活动性酒精中毒等症状嘲。另外肝移植价格昂贵,对医疗中心的设备和医护人员素质的要求较高。因此,虽然肝移植是较理想的治疗方法,发展人工肝支持系统的要求也非常迫切。理想的人工肝支持系统,应当能够提供正常肝脏复杂的合成与代谢功能、解毒功能。人工肝的研究仍然是生物医学工程研究领域的重要课题人工肝支持系统在临床应用上主要用途:因为肝脏具有很强的再生能力,通过人工肝支持系统给