血红蛋白的提取及分离.ppt

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PCR反响需提供(tígōng)的条件
1:缓冲液中进行
2:DNA模板
3:分别与两条模板链相结合的两种引物
4:四种脱氧核苷酸
5:耐热的DNA聚合酶
6:同时通过控制温度使DNA复制(fùzhì)在体外反复进行
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5
引物1
5
引物2
第二次复制
第一次复制
5
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模板(múbǎn)DNA
5
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25~30次循环〔复制(fùzhì)〕后,模板DNA的含量可以扩大100万〔220〕倍以上。
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体内DNA复制(fùzhì)与PCR的技术区别:
体内复制
PCR技术
解旋
引物
一般用DN***段
DNA聚合酶
细胞自身的DNA聚合酶(不耐高温)
TaqDNA聚合酶
复制特点
半保留复制,边解旋边复制,多起点复制。
半保留复制,完全解旋后复制,从模板链的一端开始复制。
复制的方向
子链的5’端向3’端延伸
子链的5’端向3’端延伸
在解旋酶作用下,细胞提供(tígōng)ATP,局部解开
加热到94oC,双链全部(quánbù)解开,不需解旋酶
一小段RNA
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血红蛋白(xuèhóngdànbái)介绍:
血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质,是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白是由574个氨基酸脱水缩合而成的含有四条肽链的蛋白质〔两条α链和两条β链,每一条(yītiáo)链有一个包含一个铁原子的环状血红素〕。氧气结合在铁原子上,被血液运输。因含血红素血红蛋白呈红色。血红蛋白占红细胞干重97%、总重的35%。,是血浆溶氧量的70倍。一个哺乳动物血红蛋白分子可以结合最多四个氧分子。血红蛋白也参与其他气体的转运:它能携带机体的局部二氧化碳〔大约10%〕。
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回忆:蛋白质根本单位(dānwèi)?合成场所?蛋白质的分子结构具有多样性的直接原因?根本原因?蛋白质的功能?
思考:蛋白质的别离和提取的原理(yuánlǐ)是什么?
根据蛋白质各种特性的差异,如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等,可以(kěyǐ)用来别离不同蛋白质。
主要功能
实例
组成细胞的结构成分
细胞膜中的蛋白质,染色体中的蛋白质等
运输功能
细胞膜上的载体蛋白、运输氧气的血红蛋白等
催化功能
胃蛋白酶、纤维素酶等
调节功能
生长激素、胰岛素等激素
免疫功能
B淋巴细胞受到抗原刺激后产生的抗体
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一、根底知识:
㈠凝胶色谱法〔分配(fēnpèi)色谱法〕:
1、凝胶:
一些微小多孔的球体(qiútǐ)〔内含许多贯穿的通道,由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖〕
2、概念:根据(gēnjù)相对分子质量的大小别离蛋白质的方法
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3、原理:当不同(bùtónɡ)的蛋白质通过凝胶时,相对〔〕的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程〔〕,移动速度〔〕,而〔〕的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在〔〕移动,路程〔〕,移动速度〔〕,相对分子质量不同(bùtónɡ)的蛋白质因此得以别离。
相对(xiāngduì)分子质量较小
较长
较慢
相对分子(fēnzǐ)质量较大
凝胶外部
较短
较快
〔分子筛效应〕
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用凝胶色谱法别离(fēnlí)蛋白质时,分子量大的蛋白质()
,,移动速度较快
,,移动速度较快
4、具体(jùtǐ)过程
D
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