病理学常用技术原理及技术应用.ppt

病理学
病理学常用技术的原理及应用
石英爱
吉林大学白求恩医学院病理学系
提要
大体、组织和细胞病理学技术
组织化学与免疫组织(细胞)化学技术
电子显微镜技术
显微切割技术
激光扫描共聚焦显微技术
核酸原位杂交技术
原位多聚酶链式反应技术
流式细胞术
图像采集和分析技术
比较基因组杂交技术
生物芯片技术
生物信息学技术
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大体观察
组织病理学观察
细胞病理学观察
大体、组织和细胞病理学技术
组织化学( Histochemistry)
免疫组织化学与免疫细胞化学
( Immunohistochemistry, IHC and Immunocytochemistry, ICC)
组织化学与免疫组织(细胞)化学技术
免疫组织化学染色阳性信号定位
A 细胞质内弥漫阳性(细胞角蛋白);B 细胞核阳性(雌激素受体);C 细胞膜阳性(B细胞分化抗原CD20);D 细胞膜和细胞质内点状阳性(CD30)
电子显微镜技术
肿瘤组织微血管形态的扫描电镜
通过又电子束和电子透镜组合成的电子光学系统的多极放大后,可以将微小物体放大成像,极大地提高分辨率
电镜技术使病理学对疾病的认识从组织、细胞水平深入到细胞内超微结构水平,观察到了细胞膜、细胞器和细胞核的细微结构及其病理变化
显微切割技术
冷冻切片的激光显微切割
是20世纪90年代初发展起来的一门新技术,能够从组织切片或细胞涂片上的任一区域切割下几百个、几十个同类细胞,甚至单个细胞,再进行如PCR、PCR-SSCP及比较基因组杂交等有关的分子水平的研究
激光扫描共聚焦显微技术
胶质瘤干细胞的分布和培养
激光共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope, LSCM)是将光学显微镜、激光扫描技术和计算机图像处理技术相结合而形成的高技术设备
LSCM的主要功能
LSCM对样本的要求及其局限性
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探针的选择和标记
原位杂交(In situ hybridization, ISH)的主要程序
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)
ISH技术的应用
核酸原位杂交技术
原位杂交检测人类乳头状瘤病毒
染色体的荧光原位杂交
原位PCR技术方法
原位PCR技术的应用及存在的问题
原位多聚酶链式反应技术
原位PCR(in situ PCR)技术是将PCR的高效扩增与原位杂交的细胞及组织学定位相结合,在冷冻切片或石蜡包埋组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上检测和定位核酸的技术
特异性不高,尤其是假阳性问题
技术操作复杂,影响因素太多
需要特殊的设备,如原位PCR仪,价格昂贵