补体的测定及临床应用.pptx

补体的测定及临床应用
补体是一组存在于人和脊椎动物血清中具有酶样活性、不耐热的糖蛋白
补体不是单一成分,在功能效应上是以连续反应的程序进行的,故又称补体系统
补体系统由补体固有成分、补体调节蛋白和补体受体组成
补体的存在及抗原性异物的刺激无关,在正常人血清中,含量相对稳定,但某些疾病时,含量及其活性可发生改变
补体含量与活性的检测,对机体免疫状态的评价和疾病的诊断具有重大意义
补体的含量
补体大多为糖蛋白,属于ß球蛋白
正常血清中补体各组分含量相差较大,其中C3含量最高。
补体主要在血液和肝脏中进行代谢,代谢率快,每天更新一半
补体的理化特性
补体性质不稳定,容易受各种理化因素的影响
补体标本保存在-20℃
补体的活化途径
1、经典途径
以抗原抗体复合物结合C1q启动激活的途径,又称第一途径或传统途径,是抗体介导的体液免疫应答的主要效应方式
2、MBL途径
MBL结合至细菌启动的途径,激活剂是机体的炎症反应急性期时产生的MBL和C反应蛋白等
3、旁路途径
通过微生物表面等膜性物质,从C3开始,不依赖特异性抗体的形成,在感染早期可为机体提供有效的防御。
在机体感染的过程,首先活化和发挥作用的是旁路途径和MBL途径,在特异性抗体产生时,经典途径才可发挥作用
经典激活途径
替代激活途径
MBL途径
激活物质
抗原抗体复合物
肽聚糖、酵母多糖、脂多糖
MBL相关的丝氨酸蛋白酶
起始分子
C1q
C3
C2、C4
参与补体成分
C1、C4、C2、C3、C5-C9
C3、C5-C9、B因子、D因子
C2-C9、 MASP
所需离子
Ca2+、Mg2+
Mg2+
Ca2+
C3转化酶
C4b2b
C3bBb
C4b2b
C5转化酶
C4b2b3b
C3bnBb
C4b2b3b
生物学作用
参与特异性免疫的
效应阶段,感染后期
发挥作用
参与非特异性免疫的
效应阶段,感染早期
发挥作用
参与非特异性免疫的
效应阶段,感染早期
发挥作用
三种途径比较
补体总活性测定
补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示,以50%溶血为判断终点,-CH50(经典途径)
CH50的测定方法
原理
应用绵羊红细胞(SRBC)和其相应的抗体(溶血素),作为能诱导补体活化经典途径的指示物和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解,当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时,溶血程度及补体含量和活性相关(特殊的S性关系)。将新鲜待检血清作不同稀释后,加入反应体系,测定溶血程度,以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点,可测知补体总溶血活性
CH50测定方法
1、红细胞浓度的调整
绵羊红细胞(SRBC)采自绵羊颈静脉,制备脱纤维羊血或用阿氏(Alsever)血液保存液制成抗凝血,4℃保存备用。使用前,调制成2%~5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化,可吸取少量红细胞悬液,加入20~30倍的稀释液,在542nm波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
2、溶血素滴定
溶血素可通过SRBC免疫家兔获得,一般无需纯化
试验前需先行加热56℃ 30min或60℃ 3min以灭活补体
溶血素有商品销售,可按标识效价稀释使用
自行制备的溶血素需进行滴定,确定使用浓度,在补体活性测定中,大多使用2个单位。
溶血素效价稳定,一般使用3个月后再作重新滴定