基因结构与表达分析的基本策略.pptx

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分子生物学的三大核心技术
DNA序列分析—DNA测序,1977
聚合酶链式反应—DNA扩增,1985
DNA重组技术—基因克隆,1973
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一、DNA序列分析
二、核酸分子杂交
三、聚合酶链式反应
四、基因芯片和微阵列
五、Western免疫印迹
主要内容
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(一)双脱氧末端终止法
(Sanger,1977)
一、DNA序列分析
(二)DNA自动化序列分析
(三)化学降解法(Gilbert,1977)
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FrederickSanger
1918~
WalterGilbert
1932~
TheNobelPrizeinChemistry1980
PaulBerg
1926~
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DNA测序技术基础:
高分辨率变性聚丙烯酰***凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)技术,可分离差别仅1个碱基的单链寡核苷酸DN***段。
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(一)双脱氧末端终止法(dideoxychaintermination)
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ATP、dATP和ddATP的结构
ATP
A
OH
OH
H
H
dATP
ddATP
NTP:核苷三磷酸ATP、GTP、CTP、UTP的合称;
dNTP:脱氧核苷三磷酸dATP、dGTP、dCTP、dTTP;
ddNTP:ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP;
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掺入N个核苷酸
DNA合成反应模式图
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DNA单链模板
引物
掺入ddNTP
延伸的新合成链
末端终止
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