第四章高效液相色谱.ppt

第4章高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography,HPLC)
高压、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世,导致高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)的产生。
薄壳型填料,柱效仅每米1000~3000塔板数
5~10μm球型和无定型微粒硅胶,每米5~6万理论塔板数
键合相色谱、离子色谱、疏水色谱、亲和色谱、手性色谱、脂质体色谱、生物膜色谱、整体柱色谱、微径柱和毛细管柱色谱及液相色谱-质谱联用等
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第一节高效液相色谱法的特点
基本特点
1. 高效、高速、高灵敏度
2. 填料粒径和流动相性质影响色谱柱效

操作条件
1. 流动相对分离选择性的影响
2. 柱外效应
3. 操作压力
适用范围广
2017/12/14
第二节、影响色谱峰扩展及色谱分离的因素一、液相色谱速率理论—影响色谱峰扩展因素
提高柱效的途径,也就是如何提高液相色谱的分离效率:
减小填料粒度;提高柱内填料装填的均匀性来以加快传质速率。
对于液相色谱而言,除了上述的影响因素,还有柱外展宽的影响,所谓柱外展宽是指色谱柱外各种因素引起的峰扩展。
1. 吸附色谱(adsorption Chromatography)
2. 分配色谱(partition Chromatography)
3. 离子对色谱法(ion pair Chromatography)
4. 离子交换色谱(ion-Exchange Chromatography)
5. 离子色谱法(ion Chromatography )
6. 空间排阻色谱(size Exclusion Chromatography)
需要指出的是每种色谱方法通常存在一种起支配作用的主要保留机理,但可能还存在次要的其他机理。
第三节、高效液相色谱法的主要分离类型及其分离原理
1、吸附色谱(adsorption chromatography)
原理:基于被测组分在固定相表面具有吸附作用,且各组分的吸附能力不同,使组分在固定相中产生保留和实现分离。
固定相: 固定相通常是活性硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰***等固体吸附剂,所以吸附色谱也称液固吸附色谱。活性硅胶最常用。
流动相: 弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物,如正构烷烃(己烷、戊烷、庚烷等)、二***甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙***等。
应用: 吸附色谱用于结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法,如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的分离。缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。
研究最多、应用最广泛的高效液相色谱类型。
可分为液-液色谱和化学键合相色谱。前者是早期主要分配色谱类型,以物理吸附涂渍固定液在多孔载体表面上为固定相;后者以键合相为固定相,即化学键合固定相至载体或基质表面。
化学键合相色谱巳成为占绝对优势的分配色谱类型。
2、分配色谱
原理: 主要基于样品分子在流动相和固定相间的溶解度不同(分配作用)而实现分离的液相色谱分离模式。
液-液分配色谱固定相的液体往往容易溶解到流动相中去,所以重现性很差,不大为人们所采用。
后来发展起来的键合固定相以化学键合的方法将功能分子结合到惰性载体上,固定相就不会溶解到流动相中去了。