缬沙坦后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响.doc

缬沙坦后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响
徐宪连(山东省淄博市桓台县人民医院山东淄博 256400)
【摘要】目的观察缬纱坦后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion, I/R)细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法利用Langendorff 离体心脏灌流装置,采用完全复灌/停灌的方法制备I/R模型。24只SD大鼠随机等分为:①对照(sham)组:K-H液持续灌流110min;②I/R组:停灌30 min,复灌60 min;③缬纱坦后处理(Povst)组:I/R+缬沙坦1μmol/L(再灌注头15min给药)。Hoechst 荧光染色观察凋亡情况,计算凋亡指数(AI);Western blot 检测Bcl-2、Bax的表达。结果 sham组凋亡细胞零星分布(AI=±),另两组均有大量凋亡细胞存在,且Povst组AI(±)明显低于I/R组(±)(P< );Bcl-2、Bax的表达在I/R、Povst组均明显高于sham组(P< ),Povst组Bcl-2的表达明显高于I/R组(P<),而Bax的表达与I/R组无显著差异(P> )。结论缬纱坦后处理抑制离体大鼠心肌再灌注细胞的凋亡,与上调Bcl-2表达、增加Bcl-2/Bax 比值有关。
【关键词】缬纱坦后处理 Bcl-2 Bax
随着溶栓及PCI的广泛应用,心肌再灌注损伤越来越引起人们的重视,减轻甚至避免再灌注损伤已成为人们的研究热点。缺血后处理[1]是指心肌长时间缺血后、再灌注即刻给予的几次短暂再灌注/缺血刺激,它有效减轻再灌注损伤,且与抑制细胞凋亡有关。缬沙坦能抑制心肌细胞的凋亡[2],而缬沙坦后处理对细胞凋亡的影响未见报道。本实验排除了神经、体液等因素,观察缬沙坦后处理对再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax 表达的直接影响,为药物后处理的应用提供理论依据。
1 材料和方法
实验动物和分组
雄性SD大鼠24只, 随机等分为:①对照(sham)组:K-H液(NaCl 118, NaHCO3 25, KH2PO4 , KCl , MgSO4 , CaCl2 , ,单位mmol/L)持续灌注110 min;②缺血再灌注(I/R)组: 停灌30 min, 再灌60 min;③缬纱坦后处理(Povst)组:I/R+缬沙坦1μmol/L(再灌注头15min给药)。
模型的制备
麻醉起效后开胸、取心,悬挂Langendorff装置上,行主动脉逆行灌流(以95%O2+5%CO2饱和的KH液)。MedLab 生物信号采集处理系统(南京美易生物有限公司)显示、记录。采用完全复灌/停灌的方法复制I/R模型。
凋亡细胞形态的观察及凋亡指数的测定
取材、固定,制成石蜡切片行Hoechst 染色,Zeiss荧光显微镜(德国Carl Zeiss公司)下胞体变小、胞核致密浓染或呈碎块状致密浓染的明亮蓝色细胞即凋亡细胞。凋亡细胞占细胞总数的百分比为凋亡指数(apoptosis i