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猕猴桃根抗结肠癌活性提取物的筛选及其成分分析.pdf


文档分类:医学/心理学 | 页数:约9页 举报非法文档有奖
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】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。万方数据猕猴桃根抗结肠癌活性提取物的筛选及其成分分析粱光平髅,唐文茜汗庋,杨俊婷”.遵义医药高等专科学校药学系,贵州遵义;笾菔≈泄蒲г禾烊徊锘е氐闶笛槭遥笾莨笱,,又名阳桃根、羊桃根、藤梨根,具有活血消肿、祛风利湿、清热利尿、散热止血的功效【。其含有的三生物资源,~/產摘要:采用系统溶剂提取法制备了猕猴桃根石油醚、二***甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水等嗵崛∥铮⑼ü邕蚶斗琈兰鬯嵌种结肠癌细胞、、疶、/一一和人正常结肠上皮细胞囊种谱饔谩=峁允荆ê锾腋兔烟崛∥锒許、/赴淖饔米钔怀觯。分别为./、/,且具有较高的选择指数。。一.,。。一/.M保采用液质联用技术从石油醚提取物中分析鉴定出了种成分,其中包括种萜类,窒愣顾睾种有机酸。关键词:猕猴桃根;结肠癌;化学成分;液质联用中图分类号:文献标志码:文章编号:———,珻琀一琀一/琀一痸,/—/琀一痸,/.±痬/./‘.狧,琓琘,.琩,琻—瑀甋,篈詉收稿日期:修回日期:——接受日期:~—作者简介:梁光平,男,副教授,博士,研究方向:天然药物化学。猰篻—.ㄑ读O等耍捍捩一彩Γ妒浚芯糠较颍阂┪锓治觥—:甤基金项目:贵州省科学技术基金资助项目坪匣∫籞用格式:梁光平,胡恩明,唐文茜,:.瓸:.琙,珻;甌,:—甋,。,瑆籧;籬——琓琫。瓾万方数据抑制率一一畎×!#琒作为判断药物效果安全范围的指标,选择—狧凹ㄌ崛∥锏幕С煞萜类成分目前已被证实具有明显的抗肿瘤活性,含有猕猴桃根的复方制剂胃康颗粒在临床上也用于治疗结直肠癌、胃癌等消化道肿瘤瞳5阝ê锾腋抗肿瘤研究的报道中,大多是以猕猴桃根所含三萜类成分为研究基础,其中包括以制备含三萜的猕猴桃根提取物进行细胞活性评价,也有经提取分离得到单体化合物再进行活性评价的报道。但这些研究只阐明了猕猴桃根的某种提取物具有抗肿瘤作用,或者所含某些单体成分具有抗肿瘤作用,并未对猕猴桃根不同极性提取物的抗肿瘤作用进行比较。这些研究针对的肿瘤也多只选择了具体的某一种细胞株进行测试,或对某些单一细胞的抑制作用进行研究,暂未见猕猴桃根对同种恶性肿瘤的多种细胞株的抗肿瘤作用研究。由于结肠癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一,位居女性第⒛行缘¨bê锾腋母捶制剂在临床上也用于消化道肿瘤的治疗。此外,我国猕猴桃种植面积和产量均居世界第一ê锾根资源来源也极为丰富,进一步挖掘猕猴桃根的药用价值可提升该植物的应用价值。因此,本文采用系统溶剂提取制备不同极性的猕猴桃根提取物,以多种结肠癌细胞为载体,评价不同极性提取物的体外抗肿瘤作用,再借助液质联用技术对具有最佳抑制作用的提取物进行成分分析,为猕猴桃根在结肠癌防治方面的应用进一步提供研究基础。牧嫌敕椒仪器与材料①籕统咝б合嗌一高分辨质谱联用仪公司型二氧化碳培养箱公司籑型酶标仪公司籖型旋转蒸发仪仪器籅一偷缛裙姆绺稍锵上海博讯J兔~℃⒍燃淄椤⒁宜嵋阴ァ⒄醇等均为市售分析纯试剂;觳馐约梁杭州诺扬生物有限公司②人结肠癌细胞、⑷私岢癌环蜞奏つ鸵┲猯/籉由武汉华研生物科技有限公司提供;人结肠癌紫杉醇耐药株一/、人结肠癌长春新碱耐药株一疺杀本┍蹦纱戳I锛际跹芯吭禾峁徽H结肠上皮细胞缮虾8缓馍锟萍加邢薰司提供。③猕猴桃根药材于年挛幸┡┦占于贵州省毕节市纳雍县维新镇,药材经遵义医药高等专科学校梁光平副教授鉴定为猕猴桃科植物猕猴桃的干燥根。液质联用数据由贵州省中科院天然产物化学重点实验室分析测试与品质评价中心提供。实验方法.ê锾腋崛∥锏闹票取猕猴桃根粗粉谌萘科恐校次南譡的系统溶剂提取法依次制得石油醚崛∥.、二***甲烷提取物.、乙酸乙酯提取物.、正丁醇提取物.、水提取物.。.赴钚圆馐肘ê锾腋崛∥锓直鹕柚,/等浓度梯度,按文献椒ú用ㄆ兰种提取物对一细胞奶逋庖种谱饔茫聪率郊扑阋种坡屎螅采用砑扑闫銲!V怠由于化疗药物缺乏选择性是制约其使用的主要因素随┪镅≡裥酝ǔ2捎醚≡裰甘指数大于S行В甘酱蟀踩ǚ段г酱蟆N进一步确定猕猴桃根不同提取物的安全性以指导后期化学成分分离工作,本研究按下式计算了肘猴桃根提取物对所选细胞株的选择指数:提取物对正常细胞的。。一“提取物对结直肠癌细胞的。。①供试液制备:基于以上研究结果,取猕猴桃根石油醚提取物约,加入二***甲烷溶解完全,莔微孑四す耍次9试液。②液相条件和质谱条件:参数均按文献执行。③数据处理:通过液质联用技术采集到猕猴桃根石油醚提取物的数据后,结合软件内的化合物数据库、相关文献报道的数据以及化学成分类型的一般质谱裂解规律进行成分的推测和鉴定。峁敕治提取物体外抗肿瘤活性筛选结果猕猴桃根痔崛∥锟怪琢龌钚越峁绫所示。肘ê锾腋崛∥锒种细胞均具有不同程生物资源疶、/一一、。,。.·万方数据度的抑制作用。其中,提取物对囊种作用最突出,。。达../;提取物对/籉囊种谱饔米钊酰琁!N.±/。提取物对赴抑制强度最弱,表明其毒性最低。此外,虽然提取物对一一/赴囊制作用在痔崛∥镏凶钊酰訦一疺细胞的抑制作用却优于其他痔崛∥铮琁4.±/。提取物对/赴欠窬有更好的选择性或敏感性还需进一步研究。肘ê锾腋崛∥锒运∠赴甑难≡裰甘如图尽崛∥锓直鹬欢訦一疺、赴难≡裰甘笥,对所选其他肿瘤细胞的选择指数小于;谎灾琖崛∥锒远种所选结直肠癌细胞具有较好抑制作用时的选择性并不好,仅提取物对/赴难≡裰甘较高。相较、提取物而言,、、三种提取物对纸岢Π┫赴难≡裰甘都大于纫訮崛∥锒許、/赴的选择指数最突出,分别为.、.。由此可见,提取物对所选结肠癌细胞有良好抑制作用时,还具有更好的安全性,具有进一步研究价值。,且前期已采用气质联用技术分析了相同基源的猕猴桃根石油醚提取物R虼耍狙芯考绦采用液质联用技术对其石油醚提取物进行化学成分分析,结合数据库检索以及文献报道的相关数据,从中鉴定出种成分,其中包括萜类种,香豆素郑谢种,进一步丰富了猕猴桃根化学成分研究的内容。猕猴桃根石油醚提取物的正负总离子流图见图⑼。化合物保留时间、相对分子质量、准分子离子峰、二级质谱碎片等信息详见表梁光平等:猕猴桃根抗结肠癌活性提取物的筛选及其成分分析,石油醚提取物;,二***甲烷提取物;,乙酸乙酯提表ê锾腋种提取物对窒赴囊种谱饔表褐柿S眉际醴治鲡ê锾腋兔烟崛∥锏幕С煞·图肘ê锾腋崛∥锒圆煌岢Π┫赴难≡裥灾甘取物;,正丁醇提取物;,水提取物痬—甀万方数据<”一一㈣.?.,埘!#。.取!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!R理论值叫分子式生物资源续表检测值/碎片慷铣煞类型—雪胆乙素‘萜类紫苏烯光甘草内酯㈣“黄柏***皂皮酸熊果***酸‘刺囊酸基一氢化松苓酸萜类评秦皮素汹。】羟基香豆素阱东莨菪内酯·异嗪皮啶眺香豆妒光辉缤啊帖芡。泻根甜苷元‘泻根甜苷兀““秦皮乙素幽异嗪皮啶”素酚‘,。。,。!。·,.。。。.,..,..,”~轍.。。.,.。...,..’·瓾·,.万方数据/碎片信息基本一致,故将化合物ㄎ0为雪胆乙素;/.、胛南譡ǖ腊敉***;化合物淖挤肿永胱臃逦猰/.一,丢失一后形成碎片离子/.,继续丢失一。、一:、一:后分别形成碎片离子/.、..同时在二级质谱中还有痾攘失一:形成的碎片离子,结合文献报道的白术内酯Ⅲ的/碎片信息,/.、//胛南譡道吉马***/碎片信息基本一致,故将化合物鉴定为吉马***;化合物淖挤肿永胱臃逦猰/.—一,丢失一篛形成碎片离子.,又因准分子离子峰与文献报道雪胆乙素的准分子离子峰基本相同,故将化合物.、,故将化合物ㄎW纤障换衔淖挤肿永胱臃逦猰/.挤子离子峰丢失一形成碎片离子/.,准分子离子峰丢失一。、一分别形成碎片离子痾痾易挤肿永胱臃錷/.以及碎片离子/.与文献报道光甘草内酯基本一致,故将化合物ㄎ9甘草内酯;化合物淖挤肿永胱臃逦猰/.—,与文献报道积雪草酸的准分子离子峰基本一致,且分子离子峰丢失一个一、梁光平等:猕猴桃根抗结肠癌活性提取物的筛选及其成分分析痾·.、图ê锾腋兔烟崛∥镒芾胱恿魍胱幽J剑篵,负离子模式万方数据一形成碎片离子痾绦Jб桓一、一个。形成碎片离子/.、仇/.,故将化合物ㄎ;┎菟幔换衔的准分子离子峰为痾一,依次丢失一、一形成碎片离子痾⒊穑.,且碎片离子痾/.、痾胛南譡ǖ即一甘草次酸基本一致,故将化合物ㄎ一甘草次酸;化合物淖挤肿永胱臃逦猰/.一,丢失一形成碎片离子/.,且碎片离子/.、痾/.、/.、痾胛南譡ǖ佬芄基本一致,故将化合物ㄎP芄幔换衔准分子离子峰为痾狧唬胛南报道苜蓿酸的准分子离子峰基本一致,且分子离子峰丢失一个一、一分别形成碎片离子痾痾瑀痾丢失一、一分别形成碎片离子舰/,丢失一分形成碎片离子.,故将化合物鉴定为苜蓿酸;化合物的准分子离子峰为/.唬绦解产生的碎片离子痾/.均与文献报道黄柏***的信息基本一致,故将化合物鉴定为黄柏***;化合物的准分子离子峰为/.—一,依次丢失一、一形成碎片离子痾痾蜃挤子离子峰丢失一:⒁籆纬伤槠胱映穑.、痾绦Jб籓⒁籆成碎片离子/.,或准分子离子峰丢失一、一、一形成碎片离子分子离子峰和裂解规律与文献报道皂皮酸的基本一致,故将化合物鉴定为皂皮酸;化合物的准分子离子峰为痾一,丢失一个一形成碎片离子痾绦纬傻乃槠离子痾/.、痾文献报道熊果***酸基本一致,故将化合物鉴定为熊果***酸;化合物的准分子离子峰为.—一,与文献报道刺囊酸的准分子离子峰基本一致,且分子离子峰连续丢失一、一形成碎片依次离子痾⒊穑.、痾式ɑ衔ㄎ4囊酸;化合物的准分子离子峰为痾—一,与文献报道籓一乙酰基一霍腔氢化松苓酸的准分子离子峰基本一致,且准分子离子峰依次丢失一、一。、一形成碎片离子痾/.、/.,故将化合物鉴定为籓一乙酰基一霍腔磺饣绍酸;化合物的准分子离子峰为痾一,与文献报道鼠尾草酚的准分子离子峰基本一致,且准分子离子峰丢失一笮纬苫逅片离子痾绦呀庑纬蒻/.、痾人槠胱樱式ɑ衔ㄎJ尾草酚;化合物的准分子离子峰为痾唬胛南譡ǖ灰阴;煌;蝗香酸的准分子离子峰基本一致,且分子离子峰依次丢失一。、一、形成碎片离子/.、痾式ɑ衔ㄎ口一乙酰基一一***基一乳香酸;化合物的准分子离子峰为痾一,丢失一形成碎片离子痾叶端槠胱觤/.、胛南譡ǖ黎萦K岬乃槠胱踊疽致,故将化合物鉴定为栎樱酸;化合物的准分子离子峰为痾唬JФ一形成碎片离子痾盟槠胱隅尢母核裂解形成碎片离子痾琺/.丢失一形成碎片离子痾绦JФ个一:形成碎片离子痾宜槠胱痾/.与文献报道泻根甜苷元的碎片离子相似,故将化合物鉴定为泻根甜苷元;化合物的准分子离子峰为痾—一,与文献报道淖挤子离子峰基本一致,且准分子离子峰丢失一。、一后形成碎片离子痾式ɑ物鉴定为愣顾乩嗷衔淖挤肿永胱臃逦猰/.—一,二级碎片离子痾痾/.、痾//胛南譡ǖ狼仄ひ宜的裂解规律一致,故将化合物鉴定为秦皮乙素;化合物的准分子离子峰为痾一,二级碎片离子痾/.、.、痾胛南譡,ǖ狼皮素的裂解碎片一致,故将化合物鉴定为秦皮素;化合物的准分子离子峰为痾一,与文献报道霍腔愣顾氐淖挤肿永胱峰基本一致,且准分子离子峰裂解形成的二级碎片离子痾/.、痾/墓媛捎牖衔嗨疲式ɑ衔鉴定为霍腔愣顾兀换衔淖挤肿永胱臃生物资源痾/·.、万方数据为痾一,二级碎片离子.、聊/.与文献报道东莨菪内酯的碎片离子信息基本一致,痾胛南报道东莨菪内酯的碎片信息基本一致,故将化合物鉴定为东莨菪内酯;化合物的准分子离子峰为痾一,二级碎片离子痾.、痾胛南譡ǖ酪爨浩む的碎片离子信息基本一致,故将化合物鉴定为异嗪皮啶。谢崂嗷衔淖挤肿永胱臃逦猺.—一,丢失一后形成碎片离子痾绦呀庑纬傻乃槠胱觤/.、/,故将化合物鉴定为右旋奎宁酸;化合物的准分子离子峰为.—一,二级碎片离子痾/,故将化合物鉴定为柠檬酸;化合物的准分子离子峰为痾一,二级碎片离子痾/.、仇/.、痾.、,故将化合物鉴定为香兰素;化合物的准分子离子峰为/,故将化合物鉴定为壬二酸;化合物的准分子离子峰为痾唬过与文献报道饱和脂肪酸经麦氏重排、旺断裂相同方式以及连续丢失一。后形成.、痾榷喔鏊槠胱樱式ɑ合物鉴定为棕榈酸甲酯;化合物的准分子离子峰为/.唬Jб籓纬伤槠离子痾偻ü胛南譡ǖ赖亩啾和脂肪酸经狭岩约傲Jб籆:笮纬伤槠离子痾/.、痾.、,且痾//,故将化合物鉴定为口一亚麻酸。.ǔ煞钟胩崛∥锵赴钚缘墓叵据文献报道,积雪草酸心、熊果酸心、一甘草次酸㈨㈣萦K幄、白术内酯Ⅲ㈨⑹笪膊莘觤容类成分对本研究选取的騂一赴及其他多种未选取的结直肠癌细胞具有显著的抑制作用。雪胆乙素对结直肠癌细胞具有抑制作用。同时,鉴定出的秦皮乙素阳“、东莨菪内酯¨等香豆素类成分对细胞具有显著抑制作用,异嗪皮啶阳?、谎锹樗峋认愣顾睾有机酸类成分对赴哂邢灾种谱饔谩从猕猴桃根石油醚提取物中鉴定出的棒***、⒋棠宜帷⒂倚帷⒛仕帷⑷啥岬榷种萜类和有机酸成分对本研究所选结直肠癌及其耐药细胞的抑制作用尚未见直接的研究报道。因此,可初步判断猕猴桃根提取物中所含有的萜类、香豆素类成分可能是其具有结直肠癌抑制作用的主要药效物质基础,但还需通过进一步的成分分离、活性评价、谱效关系等研究工作才能确定。论本文采用系统溶剂提取法制备了猕猴桃根不同极性的提取物,体外活性评价发现猕猴桃根不同极性的提取物对多种结肠癌细胞均具有抑制作用,尤以石油醚提取物对一赴囊种作用最突出,且具有较高的选择指数。借助液质联用技术从中也分析鉴定出了种成分,包括萜类种,香豆素郑谢种,进一步丰富了猕猴桃根化学成分研究的内容。参考文献梁光平等:猕猴桃根抗结肠癌活性提取物的筛选及其成分分析优/结舨剑獾ぃ羁。龋ê锾腋兔烟崛∥颽萄糖苷酶抑制活性及—成分分析称费芯:.硭荚叮瞥跎鹾煨牵龋谢bê锾腋С煞及药理活性的研究进展阄魇Ψ堆г貉П自然科甁荟缚悼帕A:匣贫晕赴┝俅擦菩У墓鄄靃.·.、与开发,,—琖—,,—学版:—.,,南京:南京中医药大学,:—..——万方数据叮産生物资源:.,,—匝嗄荩爬ぃ砟档ぃ龋贕狹蛔檠Ъ术的不同品种猕猴桃果实化学成分差异性研究西科技大学学报,,甁:—.汗馄剑捩茫羁。恢肘ê锾腋崛∥锏闹票讣制备抗结肠癌耐药药物中的应用::钛敲罚醮ǚ澹锍塾睿龋蛎选⑽鸭岸蚣链接侧链的小檗碱衍生物的合成及体外抗肿瘤活性ūǎ:.:.汗馄剑跷饧瘟兀龋赨狤技术的珍珠荚蓬果实抗肿瘤活性提取物的化学成分分析挛骺萍即笱аПǎ:—.甁彭红,黄品哲,宋永贵,┓浚瓹—刘建庭,仉瑜,卜睿臻,—疶—的痹棋胶囊化学物质组及人血成分的研究胁药,,:—.—疶—瓹英译丹,禹明洋,肖俊辉,—分析吉马***大鼠体内代谢产物及代谢途径中国现代应用药学,,—:.魏颖,苏秀兰,┲幸揭┐笱В’瓸築李佳美,徐伟,张雪,—/对枇杷叶水提组分分析及萜类物质的结构鉴定称饭ひ科技,,—甋:.,.,李山雷,王运杰,—/技术快速鉴定灵芝化学成分幽洗笱аП医学版,—琖·甆—,:—琇,琖——狧,—.:,.猀——,:—.琗琙.—/猙瓵琫趜./—.現琒琫.——.,.琀琒.——甋————。—。’,,—産如万方数据希疎:安徽中医药大学,:—.梁光平等:猕猴桃根抗结肠癌活性提取物的筛选及其成分分析甁:.石典花,戴衍朋,王丽凤,.,—琖—/瓹,—,,田香,拉喜那木吉拉,哈日呼,—/法鉴定地格达一短乐谢衔锛叭搜3煞谐梢:.猀—,赵永艳,杨天龙,—┐笱В瓾篐瓹,,—..,,.甀:.瓼.:—.、生物活性及药动学研究媚希杭媚洗笱В甁:瓹:....,嗉貉钕·—/,:—.:志,,—琙—猳,,’甉。:—.琀—:—.琀珺口珼瓹—,甋琒瓸,.,.:.—琇..——琂琒琓钥冢甎:。。!.珻琫瓹甋,琘琫瓻琺。。珹.,。—一:—..,,:’.琂.

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