灵芝总皂苷对结肠癌HCT116细胞的抑制作用.pdf

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。作用72h后,+一0O3j89l+一0Ol时,可极显著抑制HCTl16细胞的增殖。多酚类423+一0O2089++一0OlO53+一0O0常结肠上皮细胞NCM460无细胞毒性作,L}j(见图芳香类化合物1798+一0O2863+一0O32),因此对于正常细胞无毒性的灵芝总皂苷提取物羧酸及其衍生物1333+一0O5156+一0O2可进行接下来的促凋亡实验。有机酸及其衍生物2018+一0O4368++一0O2543+一0O4形态的影响其他杂质947+一0O3}l035+一0O6显微镜观察结果显示(见图3),,L}j于HCTll6细胞48h后,细化前和纯化后两组实验进行比较,相同质量浓度灵胞出现典型的凋亡特征,其中纯化前灵芝总皂苷质芝提取物作用于细胞时,由于纯化后皂苷类物质质量浓度为70mg/L时,细胞出现皱缩现象:质量浓度量分数提高且其他活性物质质量分数减少,当纯化达到150mg/L时,细胞进一步变小,细胞皱缩现象后的干预物对于HCTll6细胞的抑制效果优于纯化更加明显。纯化后灵芝总皂苷质量浓度为70mg/L前时,则表明皂苷类物质的作用效果优于其他活性时,细胞增殖受到影响,细胞皱缩变小程度较纯化物质,且为主要作用物质。前更加明显:当质量浓度达到150mg/,见图3。增殖的影响如图1所示,随着灵芝总皂苷提取物质量浓度善靠5≤抬拨枣学报2023年第42卷第12期万方数据:..KANGJiaxi,etal:InhibitionofColonCancerGellLineHCTl16byTotaSaponinsfromGanodermalucidum100纯化前纯化后阳性对照80望掌墼60拒墼60拒静曩釜}碧40曩+^矧坦Ⅲ矧坦Ⅲ20O2345阳性对照对照组别(a)干预24h图中l、2、3、4、5分别表示灵芝总皂苷提取物质量浓度为25、∞50、100、200、400mgL;与阳性对照组比较,8P<,48P<∞。?图2灵芝总皂苷提取物质量浓度对NCM460细胞增殖抑零制率的影响斟∞∞联Ganodt?rinalucidumsaponinsextractsonthe磐proliferationofinhibitionrateNCM460cells如02345阳性对照组别(b)干预48h10080(a)空白组(b)170零薄60磊是蜒40磐20(e)P150(f)阳性对照组02345阳性对照图3灵芝总皂苷提取物质量浓度对HCTll6细胞形态的组别影响(c)、2、3、4、5分别表示灵芝总皂苷提取物质量浓度为25、ofHCTll6cellsmorphology50、100、200、400mgll.;与BII性对照组比较,8表示P<,”表示P<。图1灵芝总皂苷提取物质量浓度对HCTll6细胞增殖抑凋亡的影响制率的影响流式细胞仪检测结果显示(见图4、图5),,随着质量浓度的增加,细胞凋亡率也在不断proliferationinhibitionrateofHCTll6cells增加,且相同质量浓度下,纯化后灵芝总皂苷提取物的促凋亡效果更明显。纯化前灵芝总皂苷质量浓度为70mg/L时,%,而纯化后为Vol42Issue122023万方数据:..,103一如丞10:壶10z掣102二翟睦睦S曾芒餐101餐101。妒耀10104参Q3Q4Q3潍誉‘。**********”10。**********”10。102lo。AnnexinV-异硫***酸荧光素AnnexinV-异硫***酸荧光素AnnexinV-异硫***酸荧光素(a)空白(b)170(C)·-_山-_山艺一山一山,掣,捌∥‘掣翟102蠛擎lo。.≯眩102莲襄S蜓餐r谨F10110l101√04爹Q3Q4≯**********舅。。100101102103104100101102103104100101102103104AnnexinV-异硫***酸荧光素AnnexinV-异硫***酸荧光素AnnexinV-异硫***酸荧光素(d)P70(e)P150(f)%;纯化前灵芝总皂苷质量浓度为150mg/L时,取物作用于HCTll6细胞48h后,%,纯化后的凋亡率可达到电位均显著降低,且相同质量浓度下,%。总皂苷提取物作用的细胞线粒体膜电位更低,进一步证明灵芝总皂苷提取物对于HCTll6细胞的促凋亡作用可通过内源性凋亡途径发挥作用。,过警◆量的ROS会影响细胞内氧化还原反应平衡,诱导细胞凋亡。图7显示,不同质量浓度灵芝总皂苷提取物作用于HCTll6细胞48h后,随着质量浓度的增加,细胞内ROS明显增加,相同质量浓度灵芝总皂苷提取物干预后,纯化后灵芝总皂苷提取物作用的细胞内ROS含量均高于纯化前,其中经过150mg/L纯化后灵芝总皂苷提取物处理的细胞,其细胞内liOS含量达到最高。—qPCR结果显示(见图8),与空白组相比,灵芝总皂苷提取物明显增加了促凋亡相关基因bax和FbOJCa的表达,降低了抗凋亡相关基凶bcl一2的表善磊5《抬授枣学报2023年第42卷第12期万方数据:..KANGJiaxi,etal:InhibitionofColonCancerCellLineHCTl16byTotalSaponinsfromGanodermalucidum65432蛔荆悄莨罂g《z酲glObaxbcl一2caspase一9caspase一3noxap53不同宁母表示不同样本同一指标差异显著(P<)。不同字母表示不同样本同一指标差异姥著(P<)。,存在于众多中草药植物中。。,且促凋亡效果也更加显著。说明灵芝醇提产物中总皂苷类物质的抑制效果优于其他物质。在此基础上,进一步探究灵芝总皂苷类物质对结肠癌HCTl16细胞的抑制机制。结果显示,灵芝总皂苷提取物可有效促进结肠癌细胞凋不同字母表示不同样本同一指标差异姥著(P<)。亡,其可能的途径为增加细胞内ROS的含量,降低图7灵芝总皂苷提取物质量浓度对HCTll6细胞内活性氧细胞内线粒体膜电位,使线粒体发生去极化变化,的影响7Effectsofdifferentmassconcentrationsof导致其通透性发生改变,,活化c(ispase一9,激活caspase一3,oxygenspecies(ROS)inHCTll6cells最终导致癌细胞的死亡。细胞凋亡是一个复杂的过程,涉及一系列基因的激活、蛋白质的表达和多种达。"e一3和物质的调控,各个途径并不是独立存在的,而是相C(,故具体的作用机制还需要进一步深入研p53也显著增多。纯化后的十预物对于这6种基因究。作者初步证实灵芝总皂苷促HCTll6细胞凋亡的调节作用较纯化前更加明显,。续灵芝总皂苷资源的研究提供了一定的科学依据。参考文献:[1]李玲,孙元章,[J].南方农业,2019,13(4):50—[J].SouthChina万方数据:..Agriculture,2019,13(4):50_55.(inChinese)[2]谢怡琼,王琪瑞,孙思雅,[J]临床医学研究与实践,2020,5(10):191—,WANGQR,SUNSY,[J].ClinicalResearchandPractice,2020,5(10):191—193.(inChinese)[3]YUEQx,GUANSH,XIEFB,[J].ChineseJournalofNaturalMedicines,2008,6(5):367—371.[4]—atherapeuticfungalbiofactory[J].Phytochemistry,2006,67(18):1985—2001.[5]YENGC,[,1999,65(3):375—379.[6]KUOKQY,YEHCY,SUBC,(B3preventstress—inducedmyocardialinjuryinmice[J].(10):1892—1896.[7]郝萌萌,王金艳,冯娜,[J]菌物学报,2019,38(6):917—,WANGJY,FENGN,—in