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基于CFD模拟的七烯甲萘醌发酵过程优化.pdf


文档分类:高等教育 | 页数:约10页 举报非法文档有奖
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】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。万方数据■■—■■基于D獾钠呦┘纵刘ǚ⒔凸逃呕■■■■■■■■■■■●■■■■■■■■,许志国,汪坤,丁健刘龙,摘要:七烯甲萘醌一琈俏豄:〈右∑糠涟韪7从ζ鞔吹牟钜欤褂眉扑懔魈辶ρ及动态吸收法对不同转速下摇瓶与搅拌釜反应器内的剪切力及氧气传递性能进行比较,并探讨氧气供应及剪切力对枯草芽孢杆菌菌体生长与一铣傻挠跋臁=峁砻鳎渥愕难跗┯Χ跃迳ぜ癕合成有促进作用,但过高的剪切力会对菌体产生破坏作用,降低一牟俊;谏鲜鼋峁搅拌釜反应器中,以较低搅拌转速痬Vさ图羟辛Γ辈捎猛ǜ谎蹩掌氧气体积分数%姆绞教岣吖┭跛剑琈产量达到/榷哉张氧气体积分数%提高ィ锏揭∑颗嘌罡咚降ァ1狙芯吭诮涟韪7从ζ髦兴捎玫慕档徒涟枳K佟提高进气氧体积分数的方法,能够有效提高对剪切敏感且高好氧微生物的发酵性能。关键词:搅拌釜反应器;挡板摇瓶;计算流体力学;氧传质速率:剪切力中图分类号:文章编号:———,:.痳大至..—...,,一,琫一瓸洗笱颰程学院,江苏无锡,.珼,.—基金项目:国家重点研发计划“绿色生物制造”重点专项项目;内蒙古自治区科技兴蒙引导项目。ㄐ抛髡撸憾〗一校┦浚苯淌冢妒垦芯可际Γ饕4邮路⒔凸こ獭⒎⒔:——万方数据生物制品发酵工艺的开发大都需经历实验室小型实验、中间规模实验和工业规模化放大这阶段。如何恰当结合实际研究与理论分析,。使大型生物反应器中上述参数与小型反应器中具有一致性,从而使得小型反应器最优培养结果转移到大型生物反应器中加以重演,这便是研究生物反应器放大的目的薄K淙辉诓煌婺I反应器中所发生的生物反应相似,但流体环境、传质方式等却不完全相同,造成细胞生长与代谢产物生成速率等特性存在较大差异,极易导致实验室小试中确定的最优工艺在大型生物反应器中无法达到同样的效果。因此,生物反应器放大是生物反应器设计和发酵工艺开发过程中的重要环节七烯甲萘醌一俏旱闹匾W槌刹糠种唬侨颂灞匦璧挠Q镏省具有生物活性的一饕S晌⑸锓⒔筒酵生产方式包括固态发酵和液体发酵两种【”。作者所在研究团队前期研究发现,摇瓶培养条件下一的最高产量可达到/锓从ζ髋养条件下的最高产量只有/3醪酵撇猓是由反应器规模的扩大,发酵罐内剪切和溶氧等环境条件与摇瓶内环境条件相差较大所造成的【。有研究者分别通过提高搅拌转速和通气量提升一的产量。然而效果有限,这是因为他们忽略了在不同的培养条件下供氧量和剪切力之问相互关联【住对于含有大量活细胞的发酵液,需要较高的搅拌转速以提高氧气传递和改善物料混合性能,但过高的搅拌转速也会带来过高的剪切力,可能影响细胞生长,最终降低目标代谢物的合成效率删。因此,需将上述因素独立出来,分别考察其对菌体生长及产物合成的影响。最终找到影响菌体生长及一成的关键因素,为一⒔凸谭糯笥呕峁依据作者对摇瓶及发酵罐规模的一⒔团嘌过程进行:投辗ú舛ǎ低潮碚饕瓶及发酵罐的剪切力和氧气传递性能。并考察培养条件变化对一⒔蜕痰挠跋臁W钪漳康是通过对⒔凸夼嘌跫挠呕岣進产量。实现一⒔蜕檀右∑抗婺V酵罐规模的放大。材料与试剂葡萄糖、蔗糖、酵母粉、大豆蛋白胨、和#汗┘呕约劣邢薰中国上海品;一曜佳罚好拦鶦公司产品:甲醇、二***甲烷、槐肌⒄和椋好拦鶶—公司产品:一昕莶菅挎吒司鶥航南大学未来食品科学中心尬提供。生物传感分析仪:山东科学院生物研究所提供;字公司产品;效液相色谱仪:静贰培养基:酵母粉鹊鞍纂蒸馏水定容至℃灭菌发酵培养基:葡萄糖崽蠖沟鞍胨袅笏ㄈ葜℃∑颗嘌üこ叹株枯草芽孢杆菌在琼脂平板上进行℃活化培养后,挑取一环接种至装有培养基的试管中,于℃、痬条件下振荡作为种子液。以体积分数为サ慕又至拷肿右接种至含有发酵培养基的挡板摇瓶或无挡板摇瓶内培养嘌露任妫〈转速按照实验设计要求分别选用、%、一,%琤殷峻杰,等:基于D獾钠呦┘纵刘ǚ⒔凸逃呕甌/瑆%甀瑀猻:琧,。.琋琄痬。万方数据嘈俜中以后ⅲ疍.,隆使用不同封口条件对进入摇瓶的氧气量进行调节。⒔⒔方式生产一U雠嘌探恚露瓤刂圃,通气量控制为痬。为独立考察剪切与溶氧对发酵过程的影响,采用以下两种不同的溶氧控制方式:控制进气氧体积分数为%的定值,采用不同搅拌转速、痳:控制搅拌转速为痬的定值,采用不同的进气氧体积分数ァァ。每发酵液进行分析,直至发酵结束。=混合物用涡旋振荡机剧烈振荡,然后以胄分离两相。最后将萃取得到的一谢嘤糜贖治觥分析技术用去离子水将发酵液稀释至适宜倍数,以ǔぜ觳庀∈鸵旱奈舛琛!确定细胞密度。用生物传感分析仪测定培养基中的葡萄糖质量浓度。使用配备有光子二极管阵列紫外检测器和字母咝б合嗌谱仪测定发酵样品的一质量浓度=量为¨挛,流动相南甲醇和二***甲烷寤任:组成,流量为分析所用波长为,一W记咴~/氏咝尺P徒摇瓶在摇床上的转动是一种绕转动轴转动的特殊公转,且转动过程中瓶身前后左右龇轿槐3植槐洹R虼嗽谝《保视为摇瓶不动,摇瓶内的发酵液流体微元受重力及绕该流体微元周期性运动的离心力的共同作用。基于此,对每个流体微元进行受力分析,相应的加速度为:式中:∞为旋转角速度;R〈驳幕刈0刖叮疚中保持为常数;V亓铀俣龋簍为运行持续时间;为戈轴方向重力加速度;瓯为岱较蛑亓加速度;必为。轴方向重力加速度。采用狤法对摇瓶内的气液两相流动状态建模,摇瓶内部存在连续的气液两相,两相间存在明显的界面,初始时刻按照装液量确定气液交界面位置对流场进行初始化,过程巾采用椒对气液两相流动形成的自由表面进行追踪。摇瓶内网格采用四面体网格进行划分,最大网格尺寸小于。湍流模型选用ǚ匠棠P汀.⒔凸轈模型建立为计算不同搅拌速度下的生物反应器募羟辛Γ褂蒙桃礐软件包对—方程进行求解。采用狤双流体模型模拟气液两相流动。将液体选为主要相,空气选为次要相。叶轮的旋转由多重参考系椒ń忻枋觯涟轴、桨叶及附近流体区域采用旋转坐标系,其他区域采用静止坐标系。气泡设置为球形,直径约为,不考虑破裂和聚结效应。基于—P偷淖枇Ρ豢悸窃谏锓从ζ鞯哪D中。此外还应用标准的牧髂P屠醇扑阋合嗟湍流动能和湍流能量耗散。挡板结构对摇瓶中流场结构的影响为比较不同培养条件下的摇瓶氧气传质能力及其对枯草芽孢杆菌细胞生长及一铣的影响,通过流体力学模拟,用体积氧传质系数带挡板摇瓶与无挡板摇瓶中气液界面的氧传质能力进行描述,‰酱蟊硎酒航缑传质能力越强。刹鸱治S糜诒碚鞔式缑婷积大小的气液比表面积坝糜诒碚饕耗ご首力的氧传质系数座№气液比表面积通常通过下式屑扑悖式中:F罕缺砻婊珹为摇瓶中的气液界面面积,R∑恐蟹⒔鸵禾寤描述氧传质系数的方法有的渗透理论、表面更新理论、最小涡旋模型等。本文中采,钚涡旋模型,模型表述如下:式中:矗..为氧传质系数;DP统J疚闹腥/PW己.∑緾¨P徒.·,嗄:万方数据只鹊㈦;Q踉诜⒔鸵褐械睦┥⑾凳籹为平均能量耗散率:∥为运动粘度。不同转速下普通摇瓶与带挡板摇瓶的传质系数如图尽星壹由于挡板的存在,相同转速下带挡板摇瓶中的液体表面具有许多褶皱,而无挡板摇瓶中的液体表面则相对光滑。随着转速的提高,无挡板摇瓶及带挡板摇瓶中的液体表面褶皱均增加,能量耗散率增大,最终导致氧传质系数大幅上升。挡板摇瓶的体积氧传质系数甚至能够超过通气时的搅拌釜反应器的传质系数㈣得髌航缑娲Φ拇首枇赡不是摇瓶发酵培养过程巾氧气传递的限制性步骤,而氧气传递的限制极有可能来自摇瓶封口处的传递阻力。因此在以下的研究中,将探讨不同封口方式对摇瓶氧气传递的影响。不同封口方式对摇瓶氧气传质的影响在不同搅拌转速下使用动态吸收法对不同封口方式摇瓶的表观传质系数进行测定,结果如图所示?S肜砺鄞氏凳恢拢煌饪谀は麓舶摇瓶及无挡板摇瓶的表观传质系数均随着转速的提高而增大,且相同转速下使用相同封口方式的带挡板摇瓶的传质系数大于无挡板摇瓶。但是这实验测定的表观传质系数远小于使用D獬的气液理论传质系数,且使用棉花塞的无挡板摇瓶传质系数大于使用一层封口膜的带挡板摇瓶,挡板对传质系数的影响小于封口膜对传质系数的影响,这证明摇瓶培养过程中封口膜的存在对摇瓶中氧气传质起主要限制作用。不同封口方式下的氧通透率在摇瓶静止时使用动态吸收法进行测定,由式斜硎鯷式巾:为封膜的氧通透率,#R∑縇孛婊只。为大气空问的氧气分压,只。。。为摇瓶空问的氧气分压,弧!NS胫弧!!O嗥胶獾囊合嘌醣ズ团ǘ取由公式可知,,斌越小,。一。。酱螅醮骄醮氏凳寤醮氏凳图煌K傧麓舶逡∑坑胛薜舶逡∑看什问鞒≡测值对比图煌K偌安煌嘈头饪谀は乱∑勘砉鄞氏凳善磊短谠嫜П甑淼期七≤匿恒悄皇燃扩一籐一量转速//罕缺砻婊转速//带挡板摇瓶徊惴饪谀转逐//∞如毒鬯万方数据爹薜舶逡∑一§。系数越大,封口膜通透性越好。从表锌梢钥闯觯棉花塞的氧通透率高于一层封口膜,远高于五层封膜,但是远小于无封膜时的氧通透率,趋势与转动时的摇瓶表观传质系数一致,进一步说明摇瓶培养时封口膜的存在对摇瓶的氧气传质起限制性作用,且棉花塞传质效果最好,一层封膜次之,五层封口膜最差。摇瓶与涟韪7从ζ髌毫鞒√匦远员为使摇瓶培养结果更好地放大至搅拌釜反应器巾,使用D夥椒ǘ圆煌涟枳K傧发酵罐形成的流场进行详细研究,并将其与摇瓶转动时形成的流场进行对比。首先比较摇瓶及发酵罐叶轮的单位发酵液体积功率消耗/,其反映气液传递过程的强弱。图砦薜舶逡∑俊⒋舶逡∑考敖涟韪7从ζ鞯疺均随转速的提高而增大,带挡板摇瓶的疺远大于无挡板摇瓶,且随转速的提高而急剧增大,甚至大于搅拌釜反应器的疺,说明挡板的存在使得挡板摇瓶内的速度分布更加无序,对气液混合作用更大,甚至大于发酵罐中搅拌桨对发酵液的作用。,剪切环境的好坏决定反应器是否适合剪切敏感型细胞的生长。图卸砸∑及搅拌釜反应器的剪切速率进行比较,,还会与挡板碰撞,引起液体的凸起和飞溅,剪切速率远大于无挡板摇瓶,甚至超过较低搅拌转速下的搅拌釜反应器。叩募羟兴俾示孀K俚奶岣叨大,这是由于随着转速的提高,流体流动速度加快,流体互相之问、流体与容器壁、流体与挡板或叶轮的碰撞作用加强,,微生物细胞受到的剪切损伤也逐渐增大,最终影响细胞的正常生长和产物的合成。因此,一味提高搅拌转速来提高发酵体系内溶解氧含量的做法不可取。棉花塞封口膜一层封口膜无封五层封口膜一眦,表煌嘈头饪谀さ难跬ㄍ嘎图煌K傧虏煌锓从ζ鞯牡ノ环⒔鸵禾寤β氏图煌K傧虏煌锓从ζ鞯募羟兴俾颍一傅带挡板摇瓶转速//涟韪7从ζ鞯ノ环⒔鸵禾寤β氏∑转速//涟韪7从ζ消姐移一●塞一捕援一¨瓶瓶摇摇饭板挡挡带无如∞舳陵:。·一一,痪●一一:,.一¨、、万方数据薜舶一层封口膜5舶一层封几膜吕本文中还使用法对不同搅拌转速下搅拌釜反应器中液体混合时间进行测定,并与D獾到的液体混合时间进行对比,以检验P偷目靠性。图谐隽瞬煌椒ú舛ǖ囊禾寤旌鲜问,可知不同方法下测定的液体混合时间均随搅拌转速的提高而降低,且基本吻合,这证明搅拌釜反应器P褪亲既返摹摇瓶中不同剪切和氧气传质条件对枯草芽孢杆菌发酵性能的影响上述研究使用D夥椒ê投辗ū较了不同转速及不同封口方式下摇瓶巾的剪切力和氧气传质速率。然而在实际的枯草芽孢杆菌菌株摇瓶发酵过程中,剪切力形薜舶和氧气传质速率饪诜绞对一暮铣捎泻斡跋旎股未可知。以下的研究将比较在不同封口方式跗传质速率拢莶菅挎吒司鶥诖舶搴臀薜板摇瓶巾发酵生产一奶匦浴首先,比较不同封口方式和转速对微生物生长的影响,结果如图尽J紫龋梗琇五层封口膜时,不论转速高低,细胞生长速率和最大㈣。。值均低于其他封口条件,这显然是由于氧气传质速率过低,发酵液中氧气匮乏造成的。其次,对于使用一层封口膜和棉花塞的批次,在相同的摇瓶类型和转速条件下,细胞生长状态没有显著差异。此外,在中、低转速条件下,培养前期挡板促进氧气传质的特性起主要作用,更有利于细胞的快速生长;培养后期挡板所带来的剪切力起主要作,铀傧赴死亡琛V到档。而存高转速条件下,挡板对细胞生长所带来的影响较小。最后,比较不同转速对细胞生长的影响,随着转速的提高,最大值芙庋跆寤质也随之升高,相同转速下无挡板摇瓶生长速率始终慢于带挡板摇瓶。图姓故静煌K偌安煌饪谔跫圆一铣傻挠跋臁WK傧嗤保褂妹藁ㄈ饪诘毒蒜短谠嫜П甑淼期图籰司方法测足的液体混合时善图煌K偌安煌饪谀は挛⑸锷で榭时间K无挡板藁ㄈ时间/兀挡板藁ㄈ口膜时阳痟凸痬痳暑;万方数据㈡薜舶逡∑一层封口膜曹套批次一柯愿哂谑褂靡徊惴饪谀さ呐危用五层封口膜的批次~孔畹停得鹘细叩氧气传质对产物合成具有积极作用。对于无挡板摇瓶培养批次,一克孀抛K俚奶岣叨岣撸憾于带挡板摇瓶培养批次,一克孀抛K俚奶高而降低。说明较小的剪切力更有利于一成,剪切力越大,细胞受到的破坏作用也越大,最终导致一拷档汀I鲜鼋峁っ髁艘∑緾模型的准确性:较小的剪切力对产物合成有促进作用,而较大的剪切力对产物合成有抑制作用。⒔凸蘖鞒《钥莶菅挎吒司⒔团嘌基于摇瓶培养结果,即采用带挡板摇瓶、棉花塞封口、转速为痳呐尉哂凶罡叩腗产量,达到/耸倍杂Φ募羟兴俾饰ǎ⒔凸夼嘌庇氪思羟兴俾识杂Φ慕涟枳速为痳NL岣⒔凸薮仕俾式高发酵体系的氧气供应能力,首先采用不同搅拌转痬蟹⒔团嘌骄糠⒔凸中不同剪切速率及不同氧气传质速率对发酵过程的影响,上述肿K偬跫碌腛悠宓揭体的氧气传输速率图羟兴俾嗜绫所示,发酵性能如图尽在发酵前期,随着搅拌转速的提高,最大细胞浓度琛!V和一铣伤俾示龃螅蚁赴生长速度快,生长周期缩短。然而,使用的批次培养笙赴ねV梗赴ǘ瓤J即幅度下降,培养笃咸烟窍囊布负跬V梗一铣杉趸骸6褂痳呐危淙辉前期细胞生长缓慢,最大㈣。。值也低于前两个批次,却始终能够维持一目焖俸铣桑钪盏牟物产量达到/%。发酵前期,高搅拌转速能够提高发酵体系中的氧气供影响速、,K图煌K偌安煌饪谀は虏锖铣汕榭表煌涟枳K偌安煌跆寤质卵跗仕俾痳—¥壶时间/无挡板摇瓶藁ㄈ/.痟巧加:Ⅻ吲蔓痬¨●万方数据应,促进细胞的快速生长和一暮铣桑悍⒔椭后期,,最终一康陀诓捎玫搅拌转速的批次,这也证明了关于搅拌釜P的准确性。富氧空气对枯草芽孢杆菌高效合成一挠跋在通气量确定的前提下,搅拌转速与发酵体系的氧气供应水平相互关联。┯τ薪细叩男枨螅n?莶芽孢杆菌细胞却无法承受供氧所需的高转速,采用提高搅拌转速的方式增强氧气供应水平在枯草芽孢杆菌菌株生产一姆⒔凸讨不可行R虼耍诤笮难芯拷斫诘徒涟枳K偬件下,利用通富氧空气的方式提高发酵体系巾的供氧水平,考察低剪切力、高供氧条件下的枯草芽孢杆菌菌株合成一男阅堋维持痳耐ㄆ亢痬的搅拌转速不变,分别通人氧气体积分数为%和%的富氧空气供氧,对枯草芽孢杆菌菌株进行发酵培养。表矶圆煌涟枳K俸徒跆寤质件下发酵体系的图羟兴俾式斜冉希煽出:相同转速下,孀沤跆寤质奶岣而提高;相同进气氧体积分数下,剪切速率随着搅拌转速的降低而降低。发酵实验结果如图荆以看出,在维持低剪切力水平涟枳K傥的前提下,供氧水平越高,葡萄糖消耗越快,细胞生长越快,最大㈣。,值越高,最终的一恳越高。发酵螅捎醚跗寤质サ富氧空气供氧的批次,%和%的批次分别提高痬%和ァ咸烟侵柿颗ǘ图煌涟枳K傧路⒔凸滩问/苫磊短嫜П甑淼期时间/产量宴日剩痟㈨。。万方数据参考文献::不论采用%还是%的进气氧体积分数。细胞生长阶段均快速下降。细胞浓度达到最大值后快速上升至较高水平笥%6杂诓捎ソ跆寤分数的批次,发酵后期偏高的问题更为突出,极有可能引起细胞的氧中毒。采用富氧空气供氧。会提高一讨的供气成本,但采用富氧空气供氧可通过采用较低的搅拌转速降低部分能耗,同时能提高一牟量。。在工业生产中采用富氧空气供氧也是可行的。在后续的研究中,将会在发酵后期降低进气氧体积分数或通气量,⑼ㄆ鳌⒌舶宓提高氧气供应,只需在设备购买安装时一次性付费即可长期使用。通过比较无挡板摇瓶及带挡板摇瓶的理论传质系数及表观传质系数,表明摇瓶培养过程中封口条件对氧气传质起主要限制作用。进一步研究了氧气供应及剪切力对枯草芽孢杆菌菌株生长及一铣傻挠跋欤峁砻鳎撼渥愕难跗┯Χ跃体生长及一铣捎写俳饔茫ü叩募羟辛会对菌体产生破坏作用,降低一牟俊T诜酵罐培养条件下,⒕妫龋锓从ζ髁鞒√匦匝芯考捌湓谏锕逃呕敕糯笾械挠τ醚芯縖浚锊导际酰蜗穑缓珼的裂殖壶菌的工业化生产试验、脂肪酸提取及应用研究嗟海褐泄Q蟠笱В琗队甁..,图煌跆寤质路⒔凸滩问,,—:.时间/—:万方数据食品锛际跹П甑淼期■噩一瓸范代娣,俞俊棠,:.琖冯涛,夏建业,,,:—.殷峻杰,等:基于D獾钠呦┘纵刘ǚ⒔凸逃呕,,,,:—.琙.—珿,,.:.甂:学报,,.甶:.——琗畁,,.瓸篴,,:..琘..猧珻.

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  • 时间2024-03-27