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番茄发酵液中乳酸杆菌的分离鉴定及对模拟胃肠液耐受性研究.pdf


文档分类:医学/心理学 | 页数:约8页 举报非法文档有奖
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】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。万方数据番茄发酵液中乳酸杆菌的分离鉴定及对模拟胃肠液耐受性研究周笑犁,吴承木唬管庆林唬⑷鸷┯⑷,覃志成唬摘要:为获得具有较好生长能力及胃肠耐受性的果蔬发酵剂,,从中分离鉴定出耆樗岣司分别命名为、、⒀芯科渖ぬ匦约岸阅D馕赋肪车哪褪苣芰ΑF渲校琇蚅粲谥参锶杆菌属;为乳杆菌属株菌的最适生长值均为,最适生长温度为~℃。耐受性研究发现,和具有更强的高温及高盐耐受性,具有更好的胆盐耐受性;耆樗岣司绕涫荓匀斯の敢夯肪尘哂辛己玫哪褪苣力,存活率均高于%。在人工肠液环境下暌鸬拇婊盥食ィ绕銵硐殖龈玫奈定性。结果表明,作者分离得到的耆楦司哂辛己玫纳ぬ匦院臀浮⒊δ褪芴匦裕狙芯结果可为果蔬发酵剂的研制及其发酵制品的开发提供参考。关键词:自然发酵;乳酸杆菌;分离鉴定;耐受性;生长性能中图分类号:文章编号:———痡..—...”,’,形珿,.贵阳学院食品科学与工程学院,贵州贵阳;笾菔∑胀ǜ叩妊9δ苁称分氐闶笛槭遥笾莨#琙’.,:,,甃瑆.,妫甌甌琫,基金项目:国家自然科学基金地区基金项目;贵州省科技计划项目重点项目毯匣∫籞点。ㄐ抛髡撸褐苄一┦浚淌冢妒垦芯可际Γ饕4邮率称芳庸じ辈锔咧祷醚芯俊—:.阳,,.收稿日期:——万方数据牧嫌敕椒食品锛记笱П甑淼期■蚕一通过微生物发酵水果、蔬菜或其汁水制成的食用酵素产品,在能保留其原有的营养物质的基础上,还能产生一些具有特定保健功能的活性物质目前食用酵素产品的生产主要有接种益生菌发酵和自然发酵两种方式,其中,自然发酵利用果蔬本身附着及自然环境中的优势菌进行发酵,,且参与菌种复杂难以掌控R虼耍昀创庸咦匀环⒔鸵褐蟹掷氩⑸选具有益生活性的优势菌种成了研究热点,但根据原料选择,其优势乳酸菌菌种可能存在一定差异。如等在酸菜中分离得到植物乳杆菌航媛媛等从苹果和梨的混合发酵液中分离得到植物乳杆菌和副干酪乳酸菌涣跷目〉却幼匀环⒔偷橄榄汁中分离得到乳酸乳球菌4送狻U陨缴降确现植物乳杆菌透敝参锶楦司鶤的耐胆盐和耐盐性能优良,且人工接种后能够改善泡菜品质R虼耍樗峋魑9叻⒔。,现在我国南北方均有广泛种植。研究发现,番茄及其制品中含有氨基酸、有机酸、矿物质、酚类化合物、类胡萝卜素和维生素等多种营养成分,具有降低血脂、降低胆固醇和抗氧化等功效G捌实验发现。自然发酵后的番茄液具有良好的抗氧化活性。且总酚和番茄红素等生物活性物质随着发酵时问的延长而鳧,但细菌的多样性却逐渐减小,其中乳球菌丰度显著减少,而乳酸杆菌的丰度显著增加,到发酵背晌7⒔鸵褐兄饕S攀凭骸璢。乳杆菌作为一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌,、乳制品及果蔬发酵食品领域中有着广泛应用。也常被用作益生菌筛选的候选菌群。但是,,定植在人体的肠道中,才能真正发挥其生理功能。因此,为了深入挖掘番茄自然发酵液中乳酸杆菌菌种资源并提高番茄等果蔬发酵液的稳定性,作者以乳酸杆菌为优势菌的匀环酵番茄液为对象,对其中乳酸杆菌进行分离、鉴定,并研究其生长特性,模拟其对胃肠道环境的耐受性、。丑。三树警胧约以新鲜番茄为原料,番茄与白砂糖质量比混匀后置于已灭菌的玻璃瓶中,封口,发酵初期每隔牌⒔竺扛牌室温发酵笾瞥煞⒔鸵篬***化钠:购于江苏强盛功能化学股份有限公司:磷酸二氢钾:购于成都金山化学试剂有限公司;胆盐、胰蛋白酶、胃蛋白酶:购于合肥博美生物科技有限责任公司;盐酸:购于国药集团化学试剂有限公司:氢氧化钠:购于天津市石英钟厂霸州市化工分厂;嘌汗河诤贾莅偎忌锛际跤邢公司。仪器与设备生化培养箱:天津市泰斯特仪器有限责任公司产品;显微镜、恒温摇床:上海泽仕光电科技有限公司产品:紫外分光光度计:日本岛津仪器有限公司产品;妊刮流电泳仪、梯度恰凝胶成像分析仪:美国猂公司产品。∈鸵骸H∠∈,。%.%.,琯覃志成,等:番茄发酵液中乳酸杆菌的分离鉴定及对模拟胃肠液耐受性研究畉甌瑆:,%峁胩致,。兜南∈,℃倒置培养~羧【浠~次至菌落一致。.樗岣司募形态学观察及革兰氏染色将所分离的菌株分别接种到碇嘌希婧阄屡嘌9鄄炀甑木湫翁咨ā⑷榘咨ɑ虻粕ǎ中问隆起,菌落呈圆形,边缘整齐,表面湿润,易于挑起的菌株。将分离得到的细菌进行革兰氏染色实验,观察菌体颜色及形态,具有革兰氏染色阳性、不运动、无芽孢、杆状等特征的初步鉴定为乳酸杆菌。序列分析将疑似乳酸杆菌的菌株活化沃廖榷ㄆ冢臀浜禾煲换栽渡锟萍加限公司进行菌株崛扩增及序列测序。系统发育树构建将测序得到的基因序列登录进行葱员榷裕⒃贛软件中—ü菇ㄏ低撤⒂鳎τ自展法煅橄低撤⒂≡龋直鹪、、℃下培养、饩值,设置銎叫校晕唇又值呐嘌龆哉铡最适生长值实验将体积分数ゾ接种至值分别为、、、、的汤中,置于℃下培养、晕唇又值呐嘌基做对照,测定菌悬液的彻值。.樗岣司哪褪苄苑治高温耐受性实验将体积分数ゾ航种到禾迮嘌校≡龋直鹪下培养、晕唇又值呐嘌魑6哉眨舛菌悬液鲫值,设置銎叫校扑憔甏婊盥省高盐耐受性实验旧将体积分数ゾ悍别接种到盐质量浓度分别为的嘌校媾嘌基为空白对照,测定菌悬液锄值,设置銎行,计算菌株存活率。人工胃液耐受性实写;佥【。配制胃蛋白酶浓度为/的人工胃液,分别调节值为和,滤膜过滤除菌后备用。然后取二次活化的菌液种。痬离心,弃掉上清液,用等体积无菌水重悬。以体积分数%分别接种至的人工模拟胃液中,℃下培养,分别于、比⊙舛ň曛担设置銎叫校⒓%。充分溶于蒸馏水中,调节值为,稀释后加入胰蛋白酶使其质量浓度达到最后四す顺,℃下培养,分别于比⊙舛ň篛柚担柚个平行,计算菌株存活率。胆盐耐受性实验取用二次活化的菌种。将种子液以体积分数シ直鸾又种敛煌ㄑ沃柿浓度、、、、、痙的禾迮嘌基中,于℃培养舛ň篛值,设置銎叫校⒓扑憔甏婊盥省式中:>甏婊盥剩ィ籄,为处理后菌悬液吸光度;,数据用平均值±标准差表示,使用等多重方法对数据进行比较,以魑2钜煜著性判断标准,最后用绘图。乳酸杆菌的分离鉴定形态学观察和革兰氏染色从番茄自然发酵液中分离得到暌伤迫樗岣司木辏直鹈名为、和。昃木渚黄穑试残危润光滑,边缘齐整,见表6跃攴直鸾懈锢际染色,均为阳性,无芽孢。呈短杆状,成对或堆状排列;和均为单生或链状排列。图蟹别显示了昃木浼熬逍翁序列分析对分离并经过形态学初步鉴定疑似乳酸杆菌的菌株进行崛。后对基因序列进行┰觥H缤所示,昃甑那碇堑缬咎醮髁燎椅廾飨酝衔玻相对分子质量均在左右,符合测序要求。和/、、.,其中与菌株同源性为ィ琇菌株同源性为ァH楦司与—菌株同源性为ァ9⒍ǖ却佣ū彼岵酥蟹掷肷秆〉株乳酸菌,经分析鉴定为植物乳杆菌,并命名为薄焦媛媛等从梨和苹果混合发酵液中分离得到植物乳杆菌透备衫胰楦司永婧拖憬痘旌戏⒔液和木瓜发酵液中分离出魏斯氏菌,在柠檬中分离出明珠串菌【。赵山山等以贵州遵义市份不同家庭自制的发酵泡菜制品分离得到曛参锶楦司,旮敝参锶楦司。说明在果蔬发酵过程中,乳酸菌为主要菌种,且随着发酵原料的不同,其种属存在一定差异。乳酸杆菌的生长特性分析最适生长温度乳酸菌的生长受环境中温度影响较大,且不同乳酸菌的最适生长温度存在一定差异。,在不同温度下分别培养螅株受试菌的㈣、网形、湿润光滑、不透明、中间隆起、不运动、无芽孢、短杆浅黄色、圆形、湿润光滑、不透明、中问隆起、不运动、无芽孢、短杆白色、圆形、湿润光滑、透明覃志成,等:∽旧旧图—∞∞∞∞”如巧.——.—万方数据圜也舯口。。。℃:培养、⒏璧发现自然发酵泡菜中的副干酪乳杆菌的最适生长温度在~℃。,当温度超过℃后,。,.钍噬⑸镌谧钍蔇湫鲁麓谢可处于最佳状态,并促进代谢产物的积累吲。如图荆株菌株在不同下培养螅㈣随的增加呈现先增加后显著减少的趋势,,其罡撸雙组差异不显著;仍然是在条件下,,,说明弱酸性环境适宜番茄发酵液中分离的乳酸杆菌生长,过高可能会影响菌体的酶活、细胞膜稳定性等,进而阻碍菌体的生长。储徐建等从青贮玉米中分离出植物乳杆菌的最适生长为;杨静等人的乳酸菌生长实验表明,植物乳杆菌在为~时生长较好幽。~中大写字母不同表示同一条件下不同株菌之问存在显著性差异:,说明对该温度具有较强的敏感性,而仍能保持一定的存活率,说明比其他昃哂懈玫母呶履褪苄浴7椒嫉仍谀蒙古传统发酵乳及酸菜汤中分离出一株乳肠球菌—,发现其在℃下仍能保持较高活性,并产生具有较高活性的耐热蛋白酶瞄豪钪局业却玉米秸秆和白菜尾菜混贮料中分离出的类干酪副乳杆菌一娴母呶掠幸欢褪苣芰1实验中和对~℃高温的耐受能力强于,说明不同乳酸杆菌的高温耐受能力存在一定的差异,可能与不同菌株的生理功能差异有关。.哐文褪苄栽诖车姆⒔蜕校A吮证产品的安全性和货架期,往往需要加入大量的食盐。因此,乳酸菌需要对发酵过程中的高盐环境具有一定的耐受能力。如图荆株菌在不同盐质..§,万方数据舳●■■一烹吲■■■丑暑酬■■■■墨斐。口/谆薄台品生物技木学报年第卷第凇鲐量浓度下培养螅婊盥仕孀叛沃柿颗ǘ鹊脑加而逐渐较少。当盐质量浓度超过/后,,和的存活率分别为.%和.%,而的生长受到了显著的抑制。其存活率仅有.%。说明耆樗岣司愿哐沃柿颗ǘ均具有一定的耐受性,其中的耐受性在盐质量浓度超过/┑确⑾址⒔腿橹蟹离出的耆樗岣司茉/的高盐质量浓度下生长旧,本实验中昃哪褪苄杂胫嗨疲但和还能耐受/的高盐质量浓度;但的耐受力低于杨静等发现的植物乳杆菌湓~/的高盐环境下仍可生长刚。.斯の敢耗褪苄人的胃液值在~,且其因食物摄入不同而波动。乳酸菌只有具备良好的胃肠道环境耐受性能,才能更好地发挥其益生功H缤所示,在人工胃液条件下培养螅株菌的存活率均不低于%,且与培养蟾髯榈拇婊盥什钜觳幌灾:而在值的条件下培养螅株菌的存活率均大于ィ渲蠰灾哂谂嘌蟮拇活率.⑶、胃蛋白酶等具有一定的适应能力,为其益生功能特性的研究提供了可能。研究者发现从香肠中分离出的植物乳杆菌对人体胃消化液缶哂辛己的耐受性,与本实验结果类似憾罹驳确⑾种物乳杆菌谌斯の敢蟠婊率低于%,较本实验结果低:。〕,食物在小肠内会停留蚓,因此益生菌要发挥益生功能,需要能耐受肠液中胰蛋白酶、胆盐等。作者分离所得的耆樗岣司猿σ旱哪褪苣覃志成,等:番茄发酵液中乳酸杆菌的分离鉴定及对模拟胃肠液耐受性研究。。图樗岣司母呶履褪苄图樗岣司哐文褪苄证图樗岣司斯の敢耗褪苄菌种蜒件斟灶享。紧/,其存活率逐渐下降,其中和在肠液环境诘拇婊盥什钜觳幌灾;和存活率下降,但仍不低于%。刘珊娜等从酸菜中分离耆楦司诔σ褐信嘌拇婊盥饰%~%【献髡叻离得到乳酸杆菌的存活率低;可能是由于原料的不同,对菌株的种属和耐受特性也会有差异。证明株乳酸杆菌具有较好人工肠液耐受性,=氤Φ定殖并发挥作用,除要具有良好的耐胃肠道酶系消化能力外,还应具有一定的胆盐耐受能力。如图所示,,、和的存活率分别为.%、.%和.%;≤%,这说明高质量浓度的胆盐显著抑制了乳酸杆菌的生长。这同王翔宇等的研究相似,菌株的存活率均随着胆盐质量浓度的增加而下降。而从发酵牦牛乳中分离的植物乳杆菌在胆盐浓度浓度内均保持了较高的存活率:发酵香肠源乳酸菌在/的高胆盐环境中培养蟮拇婊盥士筛达.%嘲:自然发酵泡菜中分离的乳酸菌在%胆盐溶液培养笃浯婊盥室廊豢晌衷%。本实验分离得到的耆樗岣司哂幸欢的胆盐耐受性,其中的耐受性更好,但都弱于泡菜、发酵香肠或牦牛乳中乳酸杆菌的胆盐耐受力,这可能与菌株功能特性及种类有关,本实验为后续乳酸菌的功能特性及生产应用研究提供了理论作者从匀环⒔偷姆岩褐蟹掷氲玫株乳酸杆菌,其中和株菌均为植物乳杆菌属的菌株同源性为ィ琇的菌株同源性为ィ憾鳯H楦司矣隠—的菌株同源性为ァIぬ匦允笛楸砻鳎琇钍噬の度是℃;培养保琇钍噬の露分别为℃和℃,而分别为℃和℃;株菌的最适生长值均为。耐受性研究发现,株菌对高温、高盐及人工胃肠环境均具有一定的耐受性。其中,具有较好的胆盐耐受性。和具有较好的高盐耐受性,具有良好的高温耐受性;株乳酸杆菌尤其是对人工胃液环境具有良好的耐受能力,存活率均高于%,在人工肠液环境下株菌的存活率超过%,尤其表现出更好的稳定性。这对它们益生功能的发挥具有潜在影响,研究结果可为果蔬发酵剂的研制及其发酵制品的开发提供参考。、肠道菌群和肠道蠕动等多方面复杂因素的影响及益生功能的特性,以期为可定植胃肠环境的功能乳酸杆菌资源开发提供理论支撑。保琇生功能,、痙基础。篖隠图樗岣宋魅斯こσ耗褪苄痙图乳酸杆菌胆盐耐受性“‘—蝗灶二菌种摹享——甽万方数据参考文献:珻王帅,贺羽,,王琳琳,,,杨静,马如慧,杨智茜,:农业与生命科学版,,—方芳,冀林立,张彦斌,、产酶条件及其酶学性质的研究称房蒲В—琎刘珊娜,王娜,冀博,:覃志成,等:,,—钕S穑呓啵钤奇龋退刈匀环⒔,,:—.琎瓼:.规骆拢爬銎剑镂模龋帕祭嬷⒔腿樗峋纳秆∮敕⒔,,—跷目。ǚ疲返希龋β甯绶⒔烷祥腥樗峋姆掷爰?捌涠嘌匝芯縖食品工业科技,,.陨缴剑钤霸埃苡裱遥龋笾菖莶酥腥樗峋姆掷爰?捌湓谂莶朔⒔椭械挠τ肹中国酿造,,:.,,—琀瑀,.,,.瓼琙.—.瓼杨洁彬,郭兴华,张蔑,,:—.王梦颖,赵国忠,韩俊燕,:.乌素,杨晓艳,班瑞,┎芳庸ぃ李志忠,窦俊伟,任海伟,,朱影,罗彤,:—.孙敏,袁凤霞,曹晓虹,⒔凸ひ担,李尧,张羽竹,张利,:.国立东,张文文,刘艳,,,:杨英歌,黄继翔,—储徐建,李长慧,刘明灿,:—.冯美琴,栾晓旭,⒔,,:—.:.龙峻瑶,张均伟,黄丽,.—籐琙..:珿—,,:—珺.—

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  • 时间2024-03-27