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碱性磷酸酶的动力学分析幻灯片.pptx

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实验四碱性磷酸酶的动力学分析
酶促反应动力学:研究酶促反应速度及其影响因素,并加以定量的阐述。
影响因素:酶浓度、底物浓度、pH、
温度、抑制剂、激活剂等。
在研究某种因素对酶促反应速度的影响时,
其余各因素均需保持恒定。
一、实验目的

、pH、底物浓度、抑制剂对酶促反应速度的影响。
。
二、实验原理

温度对酶促反应速率具有双重影响
酶的最适温度
酶的最适温度不是酶的特征性常数,它与反应所需时间有关
温度对淀粉酶活性的影响

当底物浓度较低时,V随[S]的增大而急剧上升,两者成正比关系。
随着底物浓度继续增加,反应速度增加,而幅度不断下降。
若继续加大[S],反应速度就不再增加,达到一个极限值Vmax。
底物浓度对酶促反应速度的影响
[S]与V的关系:米-曼氏方程
Vmax为最大反应速度,Km为米氏常数,[S]为底物浓度
当[S]Km时, ,反应速率与底物浓
度成正比
当[S]Km时,VVmax,反应达到最大速率
Km与Vmax的意义
1. Km值
定义:Km等于酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度,单位是mol/L。
意义:a)Km可表示酶与底物的亲和力
b)同一种酶对于不同底物有不同的Km值
c)Km是酶的特征性常数,只与酶的结构、底物和反应环境(温度、pH、离子强度)有关,与酶浓度无关
:是酶完全被底物饱和时的反应速度,与酶浓度成正比。
Km和Vmax值的测定
双倒数作图法:将米氏方程式两侧取双倒数,得
以1/V对1/[S]作图,
得出一直线。
双倒数作图法

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