实验三、鸡胚细胞的原代培养.ppt

实验三、鸡胚细胞的原代培养
一、培养细胞生长的条件
1、细胞的营养需要
a、基本营养物质:氨基酸、维生素
b、促生长因子等物质
c、此外激素也可有助于细胞生长
培养液(medium):培养基(培养液)是维持体外细胞生存和生长的溶液,分天然培养基和合成培养基。血清(FBS,FCS,CS,HS)、合成培养基, 如:DMEM、RPMI 1640和Ham F12等。
2、细胞的生存环境
a、温度: 适宜的温度与取材的动物种类有关
b、气相及pH: 5%CO2;pH: - 。
3、无污染及无毒:无毒是培养细胞的必须条件,细菌,病毒,支原体等。
二、培养细胞的生长方式
1、贴附生长:必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞
2、悬浮生长:于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。各种造血系统肿瘤细胞
每代贴附生长细胞的生长过程
潜伏期
对数生长期
停止期(平台期)
游离期:
。此时细胞质回缩,胞体呈圆球形。
10分钟一4小时
贴壁期:
细胞附着于底物上,游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。
底物:胶原、玻璃、塑料、其它细胞等
血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白(生长基质),这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上,悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。
进口塑料培养瓶涂有生长基质(化学合成的功能基团)
潜伏期
此时细胞有生长话动,而无细胞分裂。原代细胞持续约24-96 h,而肿瘤细胞或无限传代细胞仅需6-24 h
对数生长期:
细胞数随时间变化成倍增长,细胞增殖旺盛,活力最佳,最适合进行实验研究。此期时间长短因细胞本身特性及接种密度、血清浓度而不完全相同,一般可持续3-5天。
停止期(平台期):
细胞长满瓶壁后,细胞虽有活力但不再分裂
细胞数目不再增加,但仍维持一定时间的活力,此时应及时分离传代,否则细胞将因中毒而发生改变甚至死亡
机制:接触抑制、密度依赖性