下载此文档

测定试剂盒的制作方法 27.docx


文档分类:医学/心理学 | 页数:约8页 举报非法文档有奖
1/8
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/8 下载此文档
文档列表 文档介绍
该【测定试剂盒的制作方法 27 】是由【开心果】上传分享,文档一共【8】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【测定试剂盒的制作方法 27 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒的制作方法专利名称:氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒的制作方法氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂合Sl技术领域:本发明涉及医学/食品检验测定技术领域,更具体地,本发明涉及氨(氨离子)诊断/测定方法及其试剂盒。背景技术:氨测定的方法有微量扩散法、离子交换法、酶法和氨电极法等。目前应用最多的方法是酶法和基于离子选择电极的血氨测定仪分析法。扩散法是标本碱化后,释放出NH3,用酸滴定释放出的氨,或用Nessler反应形成棕黄色碘化双******进行比色。这些方法需要碱化,内源性的氨形成造成影响,使其准确性和精密度受到影响,目前已很少应用;离子交换法比扩散法更准确,CV为8%13%’离子选择电极法是利用NH3扩散到电极表面,引起电极的pH发生变化进行测定,%%,回收率高。结合具体实际,应以酶法测定为实用。检索中国专利,,却未发现比较理想的血氨测定方法。发明内容[要解决的技术问题]本发明的目的是提供一种氨(氨离子)的测定方法。本发明的另一个目的是提供一种氨(氨离子)诊断/测定试剂盒。[技术方案]本发明是通过下述技术方案实现的。本发明的方法是一种采用酶比色法(olorimetricMethod)与酶(偶)联法(CoupleReaction)的联用技术,利用测定还原型烟酰***辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处的吸光度变化测定氨(氨离子)的方法。本发明氨(氨离子)测定方法的的技术原理是根据下述氨激酶、***酸激酶、章鱼碱脱氢酶的系列催化反应完成氨+腺苷三磷酸氨激酶腺苷二磷酸+磷酰***腺苷二磷酸+烯醇式***酸***酸激酶腺苷三磷酸+***酸***酸+精氨酸+还原型辅酶章龟碱脱氢酶N2-(D_1-羧乙基)-L_精氨酸+辅酶+水本发明的方法利用氨激酶(ammoniakinase;)酶(偶)联***酸激酶(PyruvateKinase;)、章鱼碱脱氢酶(Octopinedehydrogenase;)酶促反应比色终点法。氨激酶酶解氨反应产生腺苷二磷酸,再通过(偶)联合***酸激酶、章鱼碱脱氢酶的作用,最终将还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)氧化成为辅酶(在340nm处没有吸收峰),从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度下降的程度,这样可以通过测5量340nm处吸光度下降的程度,可以测算氨(氨离子)的浓度大小。本发明是通过下述技术方案实现的。本发明涉及一种氨(氨离子)的测定方法。该氨(氨离子)测定方法的步骤如下A、,再将氨浓度调整到100微摩尔/升,得到的溶液作为标准样品;,无须预处理;将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样溶于水或缓冲液中;,其氨(氨离子)浓度为0微摩尔/升;B、试剂溶液的制备分别移取或称取缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、氨激酶、***酸激酶、章鱼碱脱氢酶、腺苷三磷酸、烯醇式***酸与精氨酸,然后将它们混合均勻,用水溶解得到所述的试剂溶液,它们的浓度分别是20-500mmol/L、、-,1000-80000U/L,1000-80000U/L、1000-80000U/L、l-100mmol/L、l-100mmol/L与l-lOOmmol/L;C、待测样品与在步骤B)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合,在温度15-45°C下反应5-60分钟,在主波长340nm与副波长405nm(如果受仪器限制可以不设副波长)下进行测定,测定其吸光度随时间的变化;D、在与步骤C)同样的条件下测定步骤A)标准样品的吸光度随时间的变化;E、在与步骤C)同样的条件下测定在步骤A)空白样品的吸光度随时间的变化;F、数据处理由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化,(氨离子)浓度测定方法,其测定的技术原理是根据下述氨激酶、***酸激酶、章鱼碱脱氢酶的系列催化反应完成氨+腺苷三磷酸氨激酶腺苷二磷酸+磷酰***腺苷二磷酸+烯醇式***酸***酸激酶腺苷三磷酸+***酸***酸+精氨酸+还原型辅酶章龟碱脱氢酶N2-(D-1-羧乙基)-L-精氨酸+辅酶+(氨离子)的测定方法,,再将其浓度调整到100微摩尔/升;,无须预处理;将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样溶于水或缓冲液中;,其氨(氨离子)浓度为0微摩尔/升;、稳定剂、还原型辅酶、氨激酶、***酸激酶、章鱼碱脱氢酶、腺苷三磷酸、烯醇式***酸与精氨酸,然后将它们混合均勻,用水溶解得到所述的试剂溶液,它们的浓度分别是20-500mmol/L、、-、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、l-100mmol/L、l-100mmol/L与l-lOOmmol/L;)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合,在温度15-45°C下反应5-60分钟,在主波长340nm与副波长405nm(如果受仪器限制,可以不设副波长)下进行测定,测定其吸光度随时间的变化;))标准样品的吸光度随时间的变化;))使用的水或缓冲液作为空白溶液的吸光度随时间的变化;-)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化,、2所述的测定方法,其特征在于使用全自动生化分析仪测定时,待测样品、所述标准样品与所述空白样品由该分析仪在设定条件下自动取样,然后在下述条件下进行测定测定方法为终点法,温度37°C,反应时间10分钟,测试主波长340nm,测试副波长405nm,被测氨样品与试剂的体积比例为1/10-1/500,反应方向为负反应,延迟时间1/0分钟,检测时间4/5分钟。、2或3所述的测定方法,其特征在于,所述的稳定剂是一种或多种选自***化钠、乙二醇、丙二醇、甘油或双乙酸钠、叠氮钠等防腐剂的稳定剂;所述的缓冲液是一种或多种选自三(羧***)氨基甲烷-盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、硼砂-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、二乙醇***缓冲液或“PBS”缓冲液的缓冲液;所述的还原型辅酶是一种或多种选自NADPH、NADH或thio_NADH的还原型辅酶。、2或3所述的测定方法,、稳定剂、还原型辅酶、腺苷三磷酸、烯醇式***酸、精氨酸、氨激酶、***酸激酶与章鱼碱脱氢酶组成的;,它是由所述的缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、腺苷三磷酸、烯醇式***酸与精氨酸组成的;试剂2,它是由所述的缓冲液、稳定剂、氨激酶、***酸激酶与章鱼碱脱氢酶组成的;其中还原型辅酶、氨激酶、***酸激酶、章鱼碱脱氢酶、腺苷三磷酸、烯醇式***酸、精氨酸在试剂1或试剂2中的位置是不限定的。,它是由所述的缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、腺苷三磷酸、烯醇式***酸与精氨酸组成的;试剂2,它是由所述的缓冲液、稳定剂、***酸激酶与章鱼碱脱氢酶组成的;试剂3,它是由所述的缓冲液、稳定剂与氨激酶组成的;其中还原型辅酶、氨激酶、***酸激酶、章鱼碱脱氢酶、腺苷三磷酸、烯醇式***酸、精氨酸在试剂1、试剂2或试剂3中的位置是不限定的。(氨离子)诊断/测定试剂盒,,在使用时用水将它们溶解得到具有下述浓度范围的可直接使用的液体试剂缓冲液20-500mmol/-7mol/--80000U/L***酸激酶1000-80000U/L章鱼碱脱氢酶1000-80000U/L腺苷三磷酸I-IOOmmo1/L烯醇式***酸1-lOOmmol/L精氨酸l-100mmol/L。(氨离子)诊断/测定试剂盒,其特征在于它有组成如下的试剂1缓冲液20-500mmol/-7mol/--IOOmmo1/L烯醇式***酸l-100mmol/L精氨酸l-100mmol/L;组成如下的试剂2缓冲液20-500mmol/-7mol/L氨激酶1000-80000U/L***酸激酶1000-80000U/L章鱼碱脱氢酶1000-80000U/L。、(氨离子)诊断/测定试剂盒,其特征在于它有组成如下的试剂1缓冲液20-500mmol/-7mol/--IOOmmo1/L烯醇式***酸l-100mmol/L精氨酸l-100mmol/L;组成如下的试剂2缓冲液20-500mmol/-7mol/L***酸激酶1000-80000U/L章鱼碱脱氢酶1000-80000U/L;组成如下的试剂3缓冲液20-500mmol/-7mol/L氨激酶1000-80000U/L。全文摘要本发明涉及利用酶比色法及酶联法技术的氨(氨离子)含量的测定方法、试剂的组成及成分,其测定的技术原理是依据氨激酶、***酸激酶、章鱼碱脱氢酶的系列催化反应完成,本发明还涉及一种氨(氨离子)诊断/测定试剂盒。本发明的测定方法灵敏度高、误差小,因此本发明的测定方法与试剂盒可以广泛地应用于临床医学/食品检验。

测定试剂盒的制作方法 27 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数8
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人开心果
  • 文件大小19 KB
  • 时间2024-04-14
最近更新