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多糖含量的测定.pdf


文档分类:医学/心理学 | 页数:约5页 举报非法文档有奖
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该【多糖含量的测定 】是由【小屁孩】上传分享,文档一共【5】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【多糖含量的测定 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。,000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后,加入碱性铜试剂,选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖,沉淀部分与苯酚-H2SO4反应,生成有色物质,在485nm条件下,有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。。适用于检测含有分子量大于10,000道尔顿葡聚糖的样品。(1)分光光度计(2)离心机(3)旋转混匀器(4),实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。(1)80%乙醇:800ml无水乙醇加水200ml。(2):100gNaOH加蒸馏水稀释至1L,加入固体无水硫酸钠至饱和。(3)铜贮存液:·5HO,。溶液可贮2存2周。(4)铜应用溶液:取铜贮存液50ml,,临用新配。(5)洗涤液:取水50ml,加入10ml铜应用溶液,,混匀。(6):取100ml浓硫酸用水稀释至1L。24(7)20g/L苯酚溶液:,加水溶解并稀释至100ml,混匀备用。(8)葡聚糖标准液:称取500mg葡聚糖(分子量500,000D)于称量皿中,105℃干燥4h至恒重,置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖,用水定容至100ml,。(9)葡聚糖标准应用液:吸取葡聚糖标准液10ml,用水稀释10倍,。(1)样品提取:称取样品1~5g,加水100ml,沸水浴加热2h,冷却至室温,定容至200ml(V1),混匀后过滤,弃初滤液,收集余下滤液。(2)沉淀高分子物质:准确吸取上述滤液100ml(V2),置于烧杯中,加热浓缩至10ml,冷却后,加入无水乙醇40ml,将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用80%乙醇洗涤3次,残渣供沉淀葡聚糖之用。(3)沉淀葡聚糖:上述残渣用水溶解,并定容至50ml(V3),混匀后过滤,弃初始滤液后,(V4),,,沸水浴中煮沸2mim,冷却后以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用洗涤液洗涤3次,残渣供测定葡聚糖之用。(4)测定葡聚糖:,用水定容至100mL(V5)。(V6),置于25ml比色管中,,10ml浓硫酸,沸水浴煮沸2分钟,冷却比色。从标准曲线上查得相应含量,计算粗多糖含量。:,,,,,,,(,,,,,,,),,,浓硫酸10ml,混匀,沸水浴2分钟,混匀,沸水浴2分钟,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,测定吸光度值(A),以葡聚糖浓度为横坐标,A为纵坐标制标准曲线。,计算粗多糖含量。葡聚糖(%)=c×V5×V3×V1××V4×V2×m=c×250/m……………公式中:c--从标准曲线上查得样品测定管中葡聚糖含量,mg;V1--样品提取时定容体积,ml;V2--沉淀高分子物质取液量,ml;V3--沉淀葡聚糖时定容量,ml;V4--沉淀葡聚糖时取液量,ml;V5--测定葡聚糖时定容体积,ml;V6--样品比色管中取样液体积,ml;m--样品称量质量,g;--将mg/g换算成g/100g的系数。(1)苯酚-HSO溶液可以和多种糖类进行显色反应,常用于总糖的测定。所以测定24过程中应注意容器及试剂中其他糖类的干扰。(2)苯酚-HSO溶液和不同类的糖反应,显色的强度略有不同,反映在标准曲线的24斜率不同。如果已知样品中糖的结构,应尽量以同类糖的纯品做标准品,或以含有已知浓度的同类产品做对照品进行检测分析;如果样品中糖的类型未知或结构多样,则只能以葡萄糖计或其他糖计报告结果。(3)试验证明葡萄糖、果糖等单糖,蔗糖、乳糖等双糖、低聚糖--棉子糖,淀粉、糊精等多糖及甜味剂糖精不干扰粗多糖测定。(4)本方法由北京市卫生防疫站建立,经中国预防医学学科院营养与食品卫生研究所验证。

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  • 上传人小屁孩
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  • 时间2024-04-14