基因工程、代谢工程部分：.pdf

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清或诱生腹水)→McAb纯化及鉴定7、叙述利用大肠杆菌重组表达人胰岛素的构建流程。:..人胰岛素的生产方法重组人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建A链和B链分别表达法:基因工程菌的构建战略:化学合成A链和B链的编码序列表达产物的后处理路线:B链中第22位上的Arg和第29位上的Lys由于良好折叠的原因,对胰蛋白酶不敏感分泌型重组人胰岛素表达法上述三种重组大肠杆菌的构建路线均采用胰岛素或胰岛素原编码序列与大肠杆菌b-半乳糖苷酶基因拼接的方法,所产生的融合型重组蛋白表达率高、稳定性强,但不能分泌,只能以包涵体的形式存在于胞质中。一种能促进融合蛋白分泌的工程菌构建策略是将胰岛素或胰岛素原编码序列与b-內酰***酶基因拼接,b-內酰***酶通常能被大肠杆菌分泌到胞外。由此获得的工程菌同时具备了稳定高效表达可分泌型融合蛋白的优良特性,为胰岛素的后续分离纯化工序减轻了负担。8、合成代谢与分解代谢的定义及相互关系分解代谢:指复杂的有机物分子通过分解代谢酶系的催化,产生简单分子、腺苷三磷酸(ATP)形式的能量和还原力(或称还原当量,一般用[H]来表示)的作用。合成代谢:指在合成代谢酶系的催化下,由简单小分子、ATP形式的能量和还原力一起合成复杂的大分子的过程。微生物通过分解代谢从环境中吸收的各种碳源、氮源等物质降:..为生命活动提供能源和小分子中间体。合成代谢所利用的小分子物质来源于分解代谢过程中产生的中间产物。分解代谢与合成代谢是互相关联、互相制约,是生命活动的基础。9、初级代谢与次级代谢的主要区别1、存在范围及产物类型不同不同的微生物可产生不同的次级代谢产物,相同的微生物在不同条件下产生不同的次级代谢产物2、对产生者自身的重要性不同初级代谢产物,是机体生存必不可少的物质。次级代谢产物对产生者本身来说,不是机体生存必需的物质。3、同微生物生长过程的关系明显不同初级代谢自始至终存在于一切生活的机体中,同机体的生长过程呈平行关系;次级代谢则通常是微生物的对数生长期末期或稳定期产生的,它与机体的生长不呈平行关系,一般可明显地表现为机体的生长期和次级代谢产物形成期两个不同的时期。4、对环境条件变化的敏感性或遗传稳定性上明显不同初级代谢产物对环境条件的变化敏感性小(即遗传稳定性大),催化初级代谢产物合成的酶专一性强,相对较为稳定。次级代谢产物对环境条件变化很敏感,其产物的合成往往因环境条件变化而停止。5、某些机体内存在的二种既有联系又有区别的代谢类型10、酶合成调节和酶活性调节的比较酶合成的调节酶活性的调节:..诱导酶组成没和诱导酶调节结果酶种类和浓度改变酶活性的可逆改变调节本质基因水平调节,控制蛋白质水平调节,调酶的合成节酶的活性调节特点间接、缓慢快速、精细、可逆调节意义既保证代谢需要,又避免代谢产物积累过避免细胞内物质和能多量的浪费联系细胞内两种方式同时存在,密切配合,高效、准确控制代谢的正常进行调节方式酶合成的诱导和阻遏酶活性的激活和抑制调节机制调节基因的表达通过代谢产物于酶的可逆性结合来调节11、微生物反馈控制体系的调节分为反馈抑制和反馈阻遏,简述二者的区别和联系。(1)定义上的区别反馈抑制:是指代谢途径的终产物对催化该途径中的一个反应(通常是第一个反应)的酶活力的抑制。其实质是终产物结合到酶的变构部位,从而干扰酶和它底物的结合。与此相反为酶活性的激活。反馈阻遏:是指终产物(或终产物的结构类似物)阻止催化该途径的一个或几个反应中的一个或几个酶的合成。其实质是调节基因的:..12、为什么选育抗代谢类似物的突变株能提高产物浓度?13、能够解除微生物正常代谢控制机制的突变株具体有哪些?(1)营养缺陷型菌株。由于合成途径中某一步骤发生缺陷,终产物不能积累,这样就解除了终产物的反馈调节,使中间产物积累或另一分支途径的末端产物得以积累。(2)抗反馈调节的突变株。突变株不再受正常反馈调节作用的影响,使终产物得以积累。(3)细胞膜通透性突变株。终产物在细胞内不能积累到引起反馈调节的浓度。(4)营养缺陷型回复突变株或条件突变株,解除终产物对关键酶的:..(5)应用遗传工程技术,创造理想的超微生物,即构建目的工程菌株。14、试述该调节模式的类型及其调节特点。顺序反馈抑制分支代谢途径中的两个末端产物,不能直接抑制途径中的第一个酶Ea,而是分别抑制分支点后的Eb和Ec,造成中间产物C的积累,高浓度的C再反馈抑制Ea。因此,只有当两个末端产物都过量时,才能对途径中的第一个酶起到抑制作用。