《生物化学大实验》.ppt

该【《生物化学大实验》 】是由【相惜】上传分享，文档一共【66】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【《生物化学大实验》 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。〔Chromatography〕,它从创造至今已有一个多世纪的历史。1903年俄国植物学家茨维特〔〕首先使用此法别离植物色素。他向填充有CaCO3粉末的柱内参加植物色素提取液,并以石油醚淋洗,由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同,色素被逐渐分开,柱上端呈黄色,较下端呈绿色,出现了不同颜色的谱带。后称之为色谱。由chroma〔色彩〕和graphs〔图谱〕构成色谱一词,层析法由此而得名。精选课件但是,当时这种方法并没引起人们太多的关注,、从玉米中别离出玉米黄色素开始,层析技术才逐渐引起了人们的重视。此后1941年Martin用具有亲水能力的硅胶介质填充的层析柱别离氨基酸成功,并提出了液-液分配层析最初的塔板论。精选课件英国生物学家Martin和Synge根据塔板论,提出了远见卓识的预言:一、流动相可用气体代替液体,与液体相比,物质间的作用力减小了,这对别离更有好处;二、使用非常细的颗粒填料并在柱两端施加较大的压差,应能得到最小的理论塔板高(即增加了理论塔板数),这将会大大提高别离效率。前者预见了气相色谱的产生,并在1952年诞生了气相色谱仪,它给挥发性的化合物的别离测定带来了划时代的变革;后者预见了高效液相色谱〔HPLC〕的产生,在60年代末也为人们所实现。80年代后期,人们在气相层析技术和液相层析技术的根底上还开展了超临界色谱。现在它们已成为生物化学与分子生物学、化学等领域不可缺少的分析别离手段。因此,Martin和Synge于1952年被授予诺贝尔化学奖。、化学及生物学特性的差异,使各组分以不同程度分布在两个相中,即固定相和流动相,当流动相流过加有样品的固定相时,各组分所受固定相的阻滞作用和受流动相的推动作用的影响各不相同,从而使各组分以不同速度移动而到达彼此别离的目的。精选课件〔1〕塔板理论层析别离技术的目的是要将混合样品中各组分彼此分开,它遵循相似相溶的原理,在互不相溶的两相〔固定相和流动相〕之间进行分配。根据塔板理论,可以把层析柱设想由假设干个层〔即塔板〕组成,被别离组分在每一个层〔塔板〕里的两相之间到达一次平衡,就进行了一次分配,相当于经过一个层〔塔板〕高。在别离过程中组分要到达多少次平衡,进行了多少次分配,应经过多少个层〔塔板〕高。理论塔板数量是衡量物质在柱内的分配次数,别离次数越多物质的别离效果越好。这样分配系数小的组分和分配系数大的组分就能彼此分开,分配系数小的组分每次到达平衡的时间短,从层析柱中先流出;分配系数大的组分每次到达平衡的时间长,从层析柱中后流出。精选课件对于一个层析柱来说,可作如下根本假设:,而且层析柱由假设干层组成。每层高度为H,称为一个理论塔板。层析柱的长度用L表示。,且忽略分子纵向扩散。。〔即不连续过程〕。。根据以上假定,将连续的层析过程分解成了间歇的动作,这与屡次萃取过程相似,一个理论塔板相当于一个两相平衡的小单元〔一次萃取〕。那么理论塔板数量n为:L/H精选课件〔2〕速率理论根据上述假设,塔板理论初步说明了组分在层析中的迁移速度。它可以定量地描述层析柱的柱效率等。对层析技术的开展起了重要的推动作用。但是塔板理论采用的是平衡过程的研究方法,忽略了许多动力学因素对柱别离效率的影响。实际上,层析别离与分子的扩散及运动速度是有关的,而且,同一溶质在不同流动相流速下将具有不同的理论塔板数,所以,后来又开展了非平衡态的层析理论,或称速率理论。该理论吸收了层析的塔板理论的观点,同时又进一步把层析别离的分配过程与涡旋流扩散、分子扩散及传质阻力三者的关系联系起来,提出了连续流塔板模型。精选课件用VanDeemter方程表示影响塔板高度的因素。H=A+B/u+Cu其中,A、B、C分别表示涡旋流扩散、分子扩散和传质阻力的3种系数;u表示流动相线性流速。由上式可以看出,当流动相流速一定时,A、B、C越小,H也越小,理论塔板数越大,柱效就越高。精选课件下面我们来讨论一下这三方面因素的影响。涡旋流扩散〔A〕流动相中的组分由于受到固定相颗粒的阻碍,不得不从各种无规那么的固体颗粒之间的间隙绕行,迫使其流动的方向不断发生改变,称为涡旋流扩散。由此可见,涡旋流现象的发生是由于固定相的颗粒大小不均匀及填充柱的不均匀引起各组分在层析柱中所发生的位移不同。它与流动相的性质、流速及组分的性质无关。因而,层析最好使用颗粒细、粒度均匀的填料作为固定相,以减少涡旋流扩散。精选课件