通则0512高效液相色谱法.doc

该【通则0512高效液相色谱法 】是由【春天春雨】上传分享，文档一共【10】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【通则0512高效液相色谱法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????高效液相色谱法:系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱,对供试品进行分别测定的色谱方法。注入的供试品,由流动相带入色谱柱内,各组分在柱内被分别,并进入检测器检测,由积分仪或数据办理系统记录和办理色谱信号。、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据办理系统组成。色谱柱内径一般为~,填充剂粒径为3~10μm。超高液相色谱仪:是适应小粒径(约2μm)填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高矫捷度检测的高效液相色谱仪。(1)色谱柱反相色谱柱:以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常有的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等;常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。正相色谱柱:用硅胶填充剂,或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常有的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和***基键合硅胶等。氨基键合硅胶和***基键合硅胶也可用作反向色谱。离子交换色谱柱:用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。手性分别色谱柱:用手性填充剂填充而成的色谱柱。1???????????????????????最新资料介绍???????????????????色谱柱的内径和长度,填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量,填充的致密与平均程度等均影响色谱柱的性能,应依照被分别物质的性质来选择合适的色谱柱。温度会影响分别收效,品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温,应注意室温变化的影响。为改进分别效果可合适提高色谱柱的温度,但一般不宜高出60℃。节余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱,流动相的pH值一般应在2~8之间。节余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相,合适于pH值小于2或大于8的流动相。(2)检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器,包括二极管阵列检测器,其他常有的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器,其响应值不但与被测物质的量有关,还与其结构有关;蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用型检测器,对所有物质均有响应,结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定范围内呈线性关系,但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量平时呈指数关系,一般需经对数变换。不相同的检测器,对流动相的要求不相同。紫外-可见分光检测器所用流动相应吻合紫外-可见分光光度法(公则0401)项下对溶剂的要求;采用低波长检测时,还应试虑有机溶剂的截止使用波长,并采用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。(3)流动相2公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????反相色谱系统的流动相常用甲醇-水系统和乙***-水系统,用紫外尾端波长检测时,宜采用乙***-水系统,流动相中应尽可能不用缓冲盐,如需用时,应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时,流动相中有机溶剂一般不低于5%,否则以致柱效下降、色谱系统不牢固。正相色谱系统的流动相:常用两种或两种以上的有机溶剂,如二***甲烷和正己烷等。品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器种类不得改变外,其他如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比率、柱温、进样量、检测器矫捷度等,均可合适改变,以达到系统适应性试验的要求。调整流动相组分比率时,当小比率组分的百分比率X小于等于33%时,赞同改变范围为~;当X大于33%时,赞同改变范围为X-10%~X+10%。若需使用小粒径(约2μm)填充剂,输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必定与之般配;如有必要,色谱条件也应作合适的调整。当对其测定结果产生争议时,应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。当必定使用特定牌号的色谱柱方能满足分别要求时,可在该品种正文项下注明。:平时包括理论板数、分别度、矫捷度、拖尾因子和重复性等五个参数。3公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????色谱系统的适用性试验定义:按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验即用规定的比较品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验,必要时,可对色谱系统进行合适调整,以吻合要求。(1)色谱柱的理论板数(n)用于议论色谱柱的分别效能。由于不相同物质在同一色谱柱上的色谱行为不相同,采用理论板数作为衡量柱效能的指标时,应指明测定物质,一般为待测物质或内标物质的理论板数。在规定的色谱条件下,注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液,记录色谱图,量出供试品主成分色谱峰或内标物质色谱峰的保留时间tR和峰宽(W)或半巅峰宽(Wh/2),按下式计算色谱柱的理论板数:n=16(tR/W)2或(t2或(tR/Wh/2)2tR、W、Wh/2可用时间或长度计(下同),但应取相同单位。(2)分别度(R)用于议论待测物质与被分别物质之间的分别程度,是衡量色谱系统分别效能的要点指标。4公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????可以经过测定待测物质与已知杂质的分别度,对色谱系统分别效能进行议论与与调整。也可以经过测定待测物质与某一降解产物的分别度,无论是定性鉴别还是定量测定,均要求待测物质色谱峰与内标物质色谱峰或特定的杂质比较色谱峰及其他色谱峰之间有较好的分别度。除还有规定外,待测物质色谱峰与相邻色谱峰之间的分别度应大于。分别度的计算公式为:式中tR2为相邻两色谱峰中后一峰的保留时间tR1为相邻两色谱峰中前一峰的保留时间W1、W2及W1,h/2、W2,h/2分别为此相邻两色谱峰的峰宽及半巅峰宽(如图)。当对测定结果有异议时,色谱柱的理论板数(n)和分别度(R)均以峰宽(W)的计算结果为准。(3)矫捷度用于议论色谱系统检测微量物质的能力,平时以信噪比(S/N)来表示。经过测定一系列不相同浓度的供试品或比较品溶液来测定信噪比。5公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????定量测准时,信噪比应不小于10;定性测准时,信噪比应不小于3。系统适用性试验中可以设置矫捷度实验溶液来议论色谱系统的检测能力。(4)拖尾因子(T)用于议论色谱峰的对称性。拖尾因子计算公式为:式中W为5%峰高处的峰宽;d1为峰顶在5%峰高处横坐标平行线的投影点至峰前沿与此平行线交点的距离(如图)。以峰高作定量参数时,除还有规定外,T值应在~之间。以峰面积作定量参数时,一般的峰拖尾或前伸不会影响峰面积积分,但严重拖尾会影响基线和色谱峰起止的判断和峰面积积分的正确性,此时应在各品种正文项下对拖尾因子作出规定。(5)重复性用于议论色谱系统连续进样时响应值的重复性能。采用外标法时,平时取各品种项下的比较品溶液,连续进样5次,除还有规定外,%;6公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????采用内标法时,平时配制相当于80%、100%和120%的比较品溶液,加入规定量的内标溶液,配成3种不相同浓度的溶液,分别最少进样2次,计算平均校正因子,%。(1)内标法按各品种正文项下的规定,精美称(量)取比较品和内标物质,分别配成溶液,各精美量取合适,混杂配成校正因子测定用的比较溶液。取必然量进样,记录色谱图。测量比较品和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算校正因子:式中AS为内标物质的峰面积或峰高;AR为比较品的峰面积或峰高;cS为内标物质的浓度;cR为比较品的浓度。再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液,进样,记录色谱图,测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算含量:7公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????式中AX为供试品的峰面积或峰高;cX为供试品的浓度;A's为内标物质的峰面积或峰高;c'S为内标物质的浓度;f为内标法校正因子。采用内标法,可防备因供试品前办理及进样体积误差对测定结果的影响。(2)外标法按各品种项下的规定,精美称(量)取比较品和供试品,配制成溶液,分别精美取必然量,进样,记录色谱图,测量比较品溶液和供试品溶液中待测物质的峰面积(或峰高),按下式计算含量:式中各符号意义同上。由于微量注射器不易精确控制进样量,当采用外标法测准时,以手动进样器定量环或自动进样器进样为宜。(3)加校正因子的主成分自己比较法测定杂质含量时,可采用加校正因子的主成分自己比较法。在建立方法时,按各品种项下的规定,精美称(量)取待测物质比较品和参比物质比较品各合适,配制待测物校正因子的溶液,进样,记录色谱图,按下式计算待测物的校正因子:校正因子=c/AAAc/ABB8公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????式中cA为待测物的浓度;AA为待测物的峰面积或峰高;cB为参比物质的浓度;AB为参比物质的峰面积或峰高。也可精美称(量)取主成分比较品和杂质比较品各合适,分别配制成不相同浓度的溶液,进样,记录色谱图,绘制主成分浓度和杂质浓度对其峰面积的回归曲线,以主成分回归直线斜率与杂质回归直线斜率的比计算校正因子。校正因子可直接载入各品种项下,用于校正杂质的实测峰面积。需作校正计算的杂质,平时以主成分为参比,采用相对保留时间定位,其数值一并载入各品种项下。测定杂质含量时,按各品种项下规定的杂质限度,将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液,作为比较溶液;进样,记录色谱图,必要时,调治纵坐标范围(以噪声水平可接受为限)使比较溶液的主成分色谱峰的峰高约达满量程的10%~25%。除还有规定外,%的杂质,峰面积的相对标准误差(RSD)应小于10%;%~2%的杂质,峰面积的RSD应小于5%;含量大于2%的杂质,峰面积的RSD应小于2%。尔后,取供试品溶液和比较品溶液合适,分别进样,除还有规定外,供试品溶液的记录时间,应为主成分色谱峰保留时间的2倍,测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积,分别乘以相应的校正因子后与比较溶液主成分的峰面积比较,计算各杂质含量。9公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版???????????????????????最新资料介绍???????????????????(4)不加校正因子的主成分自己比较法测定杂质含量时,若无法获得待测物质的校正因子,或校正因子可以忽略,也可采用不加校正因子的主成分自己比较法。同上述(3)法配制比较溶液、进样调治纵坐标范围和计算峰面积的相对标准误差后,取供试品溶液和比较溶液合适,分别进样。除还有规定外,供试品的记录时间应为主成分色谱峰保留时间的2倍,测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与比较溶液主成分的峰面积比较,依法计算杂质含量。(5)面积归一化法按各品种项下的规定,配制供试品溶液,取必然量进样,记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积,计算各峰面积占总峰面积的百分率。用于杂质检查时,由于仪器响应的线性限制,峰面积归一化法一般不宜用于微量杂质的检查。10公则0512高效液相色谱法版公则0512高效液相色谱法版1/10公则0512高效液相色谱法版