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雨生红球藻培养.doc


文档分类:幼儿/小学教育 | 页数:约28页 举报非法文档有奖
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】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。雨生红球藻的培养[纲领]虾青素(astaxanthin)拥有抗氧化、抗癌变、加强免疫等功能,可用作抗癌变预防治疗剂、抗衰老剂、饲料增添剂、食品和化妆品的着色剂,是一种拥有很大发展前程的新资源性天然产物。雨生红球藻(uspluvialis)是天然虾青素的重要根源,但是,雨生红球藻的养殖与保存相对来说比较困难,所以向来是好多科研人员的研究对象。试验第一在最适生长条件下培养雨生红球藻的运动细胞,使游动细胞的细胞密度变的尽可能的高,培养条件为:光照强度1000~1500lx;光照周期24h;光质为LED白光;温度为室温10±1℃;通空气;初始pH≈。此后改变培养基的成分,商讨单要素条件对虾青素积累量的影响,实验条件:光照强度15000~20000lx;光照周期24h;光质为LED白光;温度为室温17±1℃;不通气;初始pH≈。最后的结果表示,%%,%%,%%,说明氮元素的缺少比磷元素的缺少和盐威迫,更有益于雨生红球藻积累虾青素。[重点词]虾青素;氮饥饿;磷饥饿;盐威迫IAbstract:Astaxanthinhasantioxidant,-cancerpreventionandtreatmentagent,anti-agingagent,“newresourcesoffood”.Withtherapiddevelopmentofmedicineindustry,foodindustryandaquaculture,,:lightintensitywas1000~1500lx;lightcyclewas24h;lightqualitywaswhite;temperaturewas10±1℃,:Astaxanthin,Nitrogenstarvation,Phosphorusstarvation,...........................................................-1-....................................................-1-雨生红球藻形态及分类学特色...............................-1-雨生红球藻生活周期........................................-1-雨生红球藻培养............................................-2-外界环境对雨生红球藻生长的影响............................-2-........................................................-2-虾青素的化学特色及根源....................................-2-雨生红球藻细胞内虾青素合成及积累..........................-3-外界环境对虾青素合成的影响................................-4-虾青素的生理功能及实质应用................................-4-2试验资料与方法...................................................-6-..................................................-6-藻种.....................................................-6-主要试验试剂.............................................-6-主要试验仪器与设施........................................-6-......................................................-7-雨生红球藻的培养..........................................-7-III雨生红球藻的生长检测......................................-7-虾青素的积累..............................................-7-虾青素含量的检测..........................................-7-3试验内容.........................................................-8-..............................................-8-培养基的配置.............................................-8-试验资料的灭菌...........................................-8-接种.....................................................-9-培养.....................................................-10-生长检测.................................................-11-...................................................-12-............................................-12-4结果与讨论......................................................-13-结论............................................................-19-参照文件..........................................................-20-致谢.................................................错误!不决义书签。(uspluvialis)在分类上属于绿藻门(Chlorophata)、绿藻纲(Chlorophyceae)、团藻目(Volvocales)、红球藻科(aceae)、红球藻属,Ag)[1]。雨生红球藻细胞的形状大部分表现为广卵形,宽度约为19(usm~51μm,长度约为28μm~63μm。雨生红球藻是单细胞藻类,用孢子或合子进行生殖,内外细胞壁层的主要成分分别是是纤维素和果胶质,自由游动的雨生红球藻细胞大多含有2条鞭毛,含有多个不规则的分布在原生质体内的伸缩泡。因为游动的雨生红球藻细胞内用于进行光合作用的色素成份含有叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和类胡萝卜素,所以细胞呈绿色。因为雨生红球藻的快速分裂生长和虾青素的大批积累不一样样步,使得好多学者在研究雨生红球藻时见解的表述不清楚,造成了必然程度的纷乱。Elliot、Lee以及刘建国等先后对雨生红球藻的细胞形态和生活周期进行了系统的研究,对雨生红球藻研究文件中出现的一些纷乱见解进行了更正,将雨生红球藻的细胞形态描绘为四种:游动细胞(motilecell),指游动阶段除游动孢子之外的细胞形式,细胞呈卵形或椭圆形。动孢子(zoospore),能够由游动细胞和不动孢子在适合条件下经过无性生殖产生。生殖过程中,由细胞壁演化成的孢子囊膨胀变大,从顶端渐渐破碎开释出能自由游动的子细胞。这些从在母细胞内产生起到开释出孢子囊为止的拥有游动能力的子细胞称为游动孢子。静细胞(non-motilecell),指不运动阶段除不动孢子之外的细胞形态,在名称上与游动阶段的游动细胞相响应静孢子(aplanospore),不动阶段细胞表面上不游动呈静止状态,但是细胞不用然处于静止的休眠状态。实质上,该阶段细胞还可以够进行分裂增殖,在母细胞内产生没有鞭毛,发育至打破细胞壁开释后也不可以够游动的子细胞。这类由不动细胞经过无性生殖方式产生,到从孢子囊内开释时期的子细胞称为不动孢子[2]。雨生红球藻生活周期刘建国等[3]经过自己的察看和联合祖先研究成就后以为,雨生红球藻的生活周期主要以下:环境合合时,游动细胞以有丝分裂的方式进行无性生殖,多半母细胞产生2-4个子细胞。不论母细胞内有2个或是4个子细胞,都能察看到鞭毛的存在并能够自由游动,属游动孢子,开释出的子细胞游动孢子成为新的游动细胞;不动细胞发育为孢子母细胞和孢子囊,最后孢子从膨大的孢子囊壁中开释出来成为带有鞭毛的游动孢子并残留下透明外壳。环境不合时,游动细胞或许刚开释的游动孢子褪去鞭毛,直接转入不动细胞阶段。-1-雨生红球藻培养固然室外大池培养螺旋藻(Spirulina)和小球藻(Chlorella)已经获取成功,但因雨生红球藻生长迟缓,简单被其余藻类如小球藻(Chlorella)、原生动物等污染[4],所以有人采纳关闭玻璃管道培养雨生红球藻。该方法固然战胜了微生物污染的问题,但是培养成真相对提升了。工业培养雨生红球藻多采纳气升式反响器,实验室培养藻类多用光照培养箱,将培养箱架上的日光灯作为光源,经过日光灯的数目和光照连续的时间对光照强度和周期进行控制。外界环境对雨生红球藻生长的影响光照光照是雨生红球藻生长的重要要素,最适合雨生红球藻生长的光照强度数值大概为30μE/(㎡·s),高过50μE/(㎡·s)的光照会使分裂中的细胞由营养型转为休眠状态。固然在黑暗条件下细胞能利用有机碳源(如葡萄糖和醋酸盐)进行生长,但生长速率显然低于有光的状况。在30μE/(㎡·s)的光照条件下,连续光照与12h光暗交替没有显然的差异,但在大于50μE/(㎡·s)的光照条件下连续光照会显然控制雨生红球藻的生长在小于20μE/(㎡·s)的光照条件下连续光照反而有益于细胞的生长。光质方面红光比蓝光对雨生红球藻的生长更加有益[5]。温度最适于雨生红球藻光合自养生长的温度为25℃~28℃,当温度高于30℃时雨生红球藻的生长会遇到控制。但是较高的温度(如30℃)有益于雨生红球藻利用有机碳源进行混淆培养,这可能是较高温度影响雨生红球藻异养生长所需的酶活性的缘由[1]。(3)pH雨生红球藻最适生长的pH为中性至微碱性(pH7-8),固然有研究显示在强碱的环境下红球藻仍旧能够生长,但生长速率很低。溶解氧对于溶解氧对雨生红球藻生长的影响研究较少,当前以为较低的溶解氧(如50%饱和度)有益于雨生红球藻的自养生长,而饱和的溶解氧则有益于雨生红球藻进行异养生长[6]。碳源及氮源不一样样科学家对雨生红球藻氮源的需要持不一样样的建议。大部分的学者以为当***铵作为雨生红球藻的氮源时,第一被耗费利用的是铵离子,***根离子只有在铵离子消耗完此后才会被利用[7]。~***盐。醋酸盐是比较好的用于雨生红球藻混淆培养的碳源,醋酸盐除了有益于雨生红球藻的生长外,也很简单被雨生红球藻汲取参加虾青素的合成[8]。(astaxanthin,ASTA)的化学系统名(IUPAC)为3,3′-二羟基-β,β′-胡萝卜素-4,4-2-′-二***,分子式是C40H52O4,。纯的虾青素颜色是暗红棕色,呈粉末状,不溶于水,能溶于大部分的有机溶剂。虾青素的化学构造是由四个异戊二烯单位以共轭双键型式联系,两头又有两个异戊二烯单位构成六节环构造。虾青素含有一个长的共轭不饱和双键系统,光、热、氧化物很简单损坏它的构造。从生物体内提取虾青素的过程中,酶的作用也会损坏虾青素的这类构造。虾青素有三种不一样样的旋光异构体(见图1),(A)是雨生红球藻生物合成的虾青素异构体,(B)是酵母菌合成的虾青素异构体,(C)则是人工合成的虾青素异构体[9]。图1虾青素的三种异构体Fig1Thethreeisomersofastaxanthin虾青素的生产主要有人工合成和生物获取两种方法。-LaRoche企业。该企业生产的商品名为“CarophyllPink”的反式虾青素,是此刻市场上三文鱼饲料增添着色剂的重要根源[10]。生物获取能够从甲壳类动物、微藻、真菌等生命体中提取。甲壳类动物的甲壳中含虾青素,但含有量很低,并且甲壳中灰分和几丁质的含量相对较高,限制了虾青素的提取和再利用;雨生红球藻细胞内,虾青素含量很高,超出细胞干重的2%,被认为是最具发展远景的虾青素天然根源[11];真菌中应用最广的是红法夫酵母(Phaffiarhodozyma),1976年,Andrewes和Phaff等人在红法夫酵母中初次发现了虾青素,在此此后,好多企业在对红法夫酵母的研究上作了好多的努力,并获取了必然的进展;细菌中已知乳酸分支杆菌(Mycobacteriumlacticoda)和短杆菌(Bevibacterium)能产虾青素,此中乳酸分支杆菌只在烃类培养基上产生虾青素,短杆菌(Bevibacterium)在石油里生长,考虑到烃类发酵的不利之处和其较低的产量以及红法夫酵母的可用性,未来上述2种细菌在虾青素生产上的利用看来是没有希望的[1,12]。雨生红球藻细胞内虾青素合成及积累虾青素在雨生红球藻细胞内合成和积累的地点是影响其产量的重要要素。Sprey以为次生类胡萝卜素像初生类胡萝卜素相同也在叶绿体中形成,并且参加光合作用。但Santos和Mesquita经过电镜察看,发现虾青素不是在细胞器而是在内质网外面的透-3-明质内形成的[1]。在雨生红球藻最适生长环境下,藻细胞内的色素主假如叶绿素a、叶绿素b、β-胡萝卜素和叶黄素,这时细胞呈绿色卵圆形,细胞的生长速率很高。当环境条件不适宜雨生红球藻的分裂增值时,其光合速率和光合作用产物利用速度不均衡,致使碳水化合物的积累,脂肪酸和类胡萝卜素特别是虾青素的快速积累[13]。这时的雨生红球藻细胞变大,细胞壁变厚,细胞颜色也由绿色转变为红色。有关资料显示,任何惹起雨生红球藻细胞生长速率降低的要素都能够成为虾青素积累的要素。外界环境对虾青素合成的影响光照大部分的学者以为光照度对雨生红球藻的生长特别是虾青素的生物合成是必然的,也有人以为虾青素能够在黑暗条件下合成,但是光照条件下的合成速率比黑暗条件下高7倍。大于50μE/(㎡·s)的光照强度利于虾青素的合成,蓝色光质最有益于虾青素的积累。温度温度对雨生红球藻虾青素的生物合成的影响与光照条件很相像,前面也提到过,当温度高于30℃时虾青素会快速积累但细胞生长受控制,所以较高温度合用于雨生红球藻培养后期。营养元素氮饥饿、磷饥饿以及氮饥饿与高光强相联合可显然促使细胞内虾青素的合成,并可在人工控制下经过培养基配方的优化而保持高积累量。在盐威迫条件下,%NaCl或高浓度的NaAc[13]也能够致虾青素的积累,陆开形和蒋霞敏[14]等利用NaN3引诱雨生红球藻并发现浓度为1mmol/LNaN3办理有益于促使藻细胞的生长,而其余浓度办理则对藻生长起控制作用;但不一样样浓度办理都有益于促使虾青素的积累,此中又以1mmol/LNaN3办理后的虾青素含量最高。虾青素的生理功能及实质应用着色作用虾青素是类胡萝卜素合成的终点,它进入动物体后能够不经生物转变而直接积累在组织中,并可与肌动蛋白非特异性联合[15,16]。它的着色见效在家禽蛋黄、体色上及水产动物上显示出优胜性,比方JOHNSON等发现虾青素对鹌鹑蛋黄的着色见效显然好于万寿菊[17]。虾青素的着色作用是它被最早被开发出来的应用价值,所以当前为止虾青素最宽泛的应用主要用作三文鱼饲料增添剂。科学研究显示,素虾青素作为三文鱼的着色剂显然优于其余色素,能更有效地被三文鱼积累[1,18]。抗氧化作用虾青素的抗氧化功能高于其余类胡萝卜素,能有能控制生物膜被氧化的作用。Di等[19]研究了多种类胡萝卜素猝灭分子氧的能力,发现猝灭分子氧的能力为虾青素>α-胡萝卜素>β-胡萝卜素>黄质>黄体素>胆红素>胆绿素。虾青素的强抗氧化活性还表此刻消除光引诱的威迫,可作为暗藏的光保护剂用于阻截皮肤的光老化。-4-Cornnor等[20]人分析了虾青素、胡萝卜素等保护小鼠肾纤维细胞免受UVA引诱产生的氧化压力的能力,结果显示虾青素保护机体免受UVA光引诱的氧化见效最正确。(3)抗癌作用免疫学研究显示,类胡萝卜素拥有减小肿瘤等抗癌功能。Gradelet等[21]的研究发现虾青素、β-胡萝卜素在降低肝癌细胞的数目和大小方面见效显然,而番茄红素没有效。Kozuki等[22]对虾青素等8种类胡萝卜素控制老鼠腹水肝细胞瘤发病的活性进行了研究,证明这些类胡萝卜素能够减少肝细胞瘤的发生。Tnaka等[23]研究了虾青素对由一种亚硝***所惹起的雄性ICR老鼠的膀胱癌和由一种硝基喹啉氧化物所惹起的雄性F344老鼠的口腔癌的化学预防作用后发现,虾青素能够作为暗藏的化学预防剂,有效预防膀胱癌和口腔癌的发生。(4)加强免疫作用虾青素还可以够显然的促使淋奉承抗体特别是T细胞有关抗原抗体的产生。Jyonoychi等[24]人的研究结果表示虾青素能加强T细胞刺激人体血细胞免疫球蛋白的产生,可有效防备视网膜的氧化和感光器细胞的损害,据此能够将虾青素作为治疗眼科疾病的药物。Jyonouchi等[25]人的研究结果显示了虾青素能提升人体免疫球蛋白的产生。对于养殖的水产品、牲畜禽等,虾青素在防治疾病方面有与对人类相像的功用,所以,假如喂以含有必然浓度虾青素的饲料后,会提升它们的抗病能力。保护心血管健康作用类胡萝卜素对以各样脂蛋白形式存在的胆固醇含量有显然影响,对心血管系统有显然的保护见效。当前以为致使动脉粥样化的低密度脂蛋白的含量与高血压、心绞痛、心肌拥堵等心血管系统疾病的流行有正面有关性,高密度脂蛋白的含量和心血管健康之间存在反面有关性。研究报导当在老鼠的饮食中增添虾青素时,高密度脂蛋白的含量有显然的增添;而增添其余的类胡萝卜素、β-胡萝卜素时,对高密度脂蛋白没有效果[26]。由此能够看出,虾青素有保护心血管系统的作用。综合虾青素的生理特色及作用来看,因为虾青素拥有抗氧化、抗肿瘤和加强免疫力等好多重要的生理和生物学功能,使得其在食品增添剂、水产养殖、保健品和医药工业等方面拥有广阔的应用远景。当前美国的食品药品管理局已赞***工合成反式构造的虾青素用作水产养殖的增添剂,但是此刻市场上虾青素的售价很高,其人工合成品的单价达2000~2500美元/kg[27]。所以研究和开发虾青素拥有重要的商业和经济价值。近来几年来我国的虾青素研究也步入新的领域,据报导,中科院昆明植物所黄俊潮研究组与北京大学、香港大学合作,培养出生界首例能高产虾青素的工程番茄新品种,其富含自然界中最强的抗氧化剂虾青素,拥有极大的家产化和商业化应用远景[28]。-5-

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