分子生物学方法.pptx

该【分子生物学方法 】是由【小屁孩】上传分享，文档一共【87】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【分子生物学方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。分子生物学研究方法1、重组DNA技术发展史上的重大事件2、DNA操作技术3、基因克隆的主要载体系统4、基因的分离与鉴定2021/10/101分子生物学从20世纪中叶开始高速发展,最主要的原因之一是基因操作和基因工程技术的进步。基因操作:DNA的切割和连接、核酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、核酸序列分析、基因的人工合成、定点突变和PCR扩增。这是分子生物学研究的核心技术。基因工程:在体外将核酸分子插入载体分子中,使之进入寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达。2021/10/102跨越天然物种屏障、把来自任何生物的基因置于毫无亲缘关系的新的寄主生物细胞之中的能力,是基因工程技术区别于其他技术的根本特征。本章将在回顾重组DNA技术史上主要事件的基础上,讨论DNA操作技术、基因克隆的常用载体系统以及基因的分离与鉴定等3个环节。2021/10/1035·1重组DNA技术史上的重大事件半个世纪以来,分子生物学研究取得了前所未有的进步,主要有3大成就:第一,解决了遗传的物质基础问题--基因的分子载体是DNA;第二,DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题;第三,“中心法则”和操纵子学说,成功地破译了遗传密码,阐明了遗传信息的流动与表达机制。2021/10/104DNA分子体外切割与连接技术及核苷酸序列分析技术的进步直接推动了重组DNA技术的产生和发展。重组DNA的核心是用限制性核酸内切酶和DNA连接酶对DNA分子进行体外切割和连接。这些酶的发现和应用是现代生物工程技术史上最重要的事件。限制性核酸内切酶能从特定碱基序列位点切开DNA。1972,Boyer实验室发现核酸内切酶EcoRI能特异识别GAAUC序列,将DNA在这个位点切开产生具有粘性末端的小片段。2021/10/105他们还发现,EcoRl酶切产生的任何不同来源的DN***段能通过粘性末端之间碱基互补作用而彼此“粘合”起来。此后,大量类似于EroRl但具有独特识别序列的核酸内切酶被陆续发现。到目前为止,科学家已经几乎能随心所欲地把任何DNA分子切割成一系列不连续的片段,再利用凝胶电冰技术将这些片段按照分子量大小逐一分开,以供下一步研究。2021/10/1062021/10/1072021/10/1085·2DNA操作技术植物基因组DNA的提取:液氮对植物组织进行研磨--破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜,使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、***仿抽提的方法去除蛋白,得到的DNA溶液经乙醇沉淀。2021/10/109材料1·三羟***氨基甲烷(Tris)2·乙二***四乙酸(EDTA)3·***化钠4·?-巯基乙醇5·***化钾6·异丙醇7·乙醇8·琼脂糖9·十二烷基硫酸钠(SDS)10·EP管11,陶瓷研钵12·加样枪和吸头13·***仿14·酚试剂1·细胞提取液(100mmol/LTris·HCl=50/·0)(100mL分装为10mL),5mmoI/LEDTA,500mmol/%SDSlmol/L?-琉基乙醇2·5mol/LKCl2021/10/1010