一种含抗体模拟物的新型抗生素及其制备方法与应用的制作方法.docx

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为药箱所备试剂),扩增条件变性950C,35秒,退火53°C,70秒,延伸68°C,17分,共20个循环;(37°C,1小时),取Iul反应物与XLl-Blue感受态细胞50ul冰孵30分钟,热冲击42°C,45秒,再置入冰中2分钟;,220rpm,37°C摇菌1小时,取50_100ul反应物铺板(LB培基加琼脂,加50ug/ml氨苄青霉素,37°C过夜);,提取质粒后测序确定突变成功;-21工程菌感受态细胞40ul冰孵5分钟,热冲击42°C,30秒,再置入冰中2分钟,加入SOC培基160ul,220rpm,37°C摇菌1小时后铺板(LB培基加琼脂,加50ug/ml氨苄青霉素,37°C过夜),挑取单克隆菌落大量增菌;,8-10升FB培基,250rpm,30°C,3-4小时;升温至42°C,;降温至37°C,;4°C,6000g,20分钟离心沉淀菌体,取4°C,50mM硼酸缓冲液(,2mMEDTA)80-100ml悬浮菌体,加入PMSF50ug后超声破碎菌体(4°C,400ff,1分钟,重复4-5次,间歇2-3分钟确保菌液温度),高速离心沉淀破碎的菌体(475,OOOg,90分钟),取上清加入硫酸链霉素500万单位沉淀DNA0°C搅拌1小时),10,000g,40C,10分钟离心沉淀后,取上清装入分子量15,