一种BL21(DE3)ΔaroA菌株的构建方法及其应用的制作方法.docx

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得PJA1403质粒,其中,P5和P6引物为:P5:5'-AAATC-3'P6:5'-ACTGTAGACAC-3';用EcoRI和ΚρηI分别双酶切pJA1402和pJA1401质粒,将获得的两端含有EcoRI和ΚρηI粘性末端的ar〇A-U基因片段连入线性化的pJA1401质粒,得到含有ar〇A-U基因片段和含有Kan抗性的FRT基因片段的PJA1404质粒;用SalI和Hindlll分别双酶切pJA1403和pJA1404质粒,将获得两端含有SalI和Hindlll粘性末端的ar〇A-D基因片段连入线性化的PJA1404质粒,构建获得含有依次连接的ar〇A-U基因片段、FRT(Kan)基因片段和ar〇A-D基因片段的pJA1405质粒;以P3和P6作为引物,PJA1405质粒为模板,PCR扩增即可获得aroA基因敲除打靶片段。5.-种权利要求4所述的BL21(DE3)ΛaroA菌株的构建方法中得到的含有依次连接的aroA-U基因片段、FRT(Kan)基因片段和aroA-D基因片段的pJA1405质粒。6.-种权利要求4所述的BL21(DE3)ΛaroA菌株的构建方法中得到的含有依次连接的aroA-U基因片段、FRT(Kan)基因片段和aroA-D基因片段的得aroA基因敲除打靶片段。(DE3)八&1*(^菌株的构建方法中得到的?从1405质粒的菌株。(DE3)ΛaroA菌株的构建方法得到的BL21(DE3)ΛaroA菌株。(BL21(DE3)AaroA)菌株,其特征在于,将pCP20质粒转化入权利要求8所述的BL21(DE3)ΛaroA菌株,得到BLA_(BL21(DE3)ΛaroA)菌株。(DE3)AaroA菌株在功能互补中的应用。