免疫复习.doc

一、多克隆抗体制备技术
抗原半抗原+载体
佐剂
免疫动物(3-5次)

动物采血,分离血清

抗血清纯化、鉴定、保存
二、福氏佐剂
不完全佐剂:液体石蜡+羊毛脂
完全佐剂:液体石蜡+羊毛脂+卡介苗
免疫动物
三、选择动物:哺乳类和禽类
1)适龄、健壮、无感染
2)抗原与免疫动物种属关系:差异越远越好
3)抗血清量的需要:量大,选用马、羊等大动物,量小,选用兔、豚鼠
4)抗血清分为R(rabbit)型和H( horse)型,R型免疫血清具有较宽的等价带,适于做诊断试剂;H型免疫血清等价带较窄,一般用于做免疫治疗。
四、免疫方法:
剂量:合适,太大,易引起免疫耐受
途径:多用皮内或皮下多点注射(足掌、背部两侧), 腋窝淋巴结直接注射,静脉、腹腔注射
间隔时间:第一次免疫 10-20天第二次免疫 7-10天第三次,总次数5-8次。
五、HAT选择培养基的原理HAT选择培养基组分:次黄嘌呤(hypoxanthine,H)氨甲蝶呤(aminopterin,A):叶酸拮抗剂,胸腺嘧碇核苷(thymidine,T)
六、细胞DNA合成途经
:次黄嘌呤(H)
HGPRT
:
氨基酸鸟嘌呤核苷酸
谷氨酰***(A-)
尿核苷单鳞酸胸腺嘧碇核苷酸
TK
:胸腺嘧碇核苷(T)
七、免疫动物培养骨髓瘤细胞

收集致敏的B淋巴细胞收集骨髓瘤细胞

细胞融合
HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞
检测筛选阳性细胞

克隆化培养(反复3-5次)

获得稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株

McAb的制备(杂交瘤培养上清或诱生腹水)

McAb 纯化及鉴定
八、:* 概念:与抗原同时或预先注射于机体,能增
强机体免疫应答或改变免疫应答类型的物质。
(precipitation)是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现的沉淀现象,其特性与经典的抗原抗体反应相同。
3、凝集反应细菌、红细胞等颗粒性抗原或可溶性抗原(或抗体)与载体颗粒结合成致敏颗粒后,与相应抗体(或抗原)在适当电解质存在下,形成肉眼可见的凝集现象,称为凝集反应
4、酶免疫技术:是以酶标记的抗体(抗原)作为主要试剂,将抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术
5、肿瘤标志物TM :在肿瘤发生、发展过程中,由肿瘤细胞本身产生的或是由机体对肿瘤细胞反应而产生的,反应肿瘤存在和生长的一类物质。
6、自身免疫病(autoimmune disease,AD)由于过度而持久的自身免疫反应导致组织、器官损伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病。
7、抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)指针对真核细胞核成分的一类自身抗体的总称。
诊断SLE的重要指标。
8、超敏反应(Hypersensitivity)即变态反应(allergy):是已致敏的机体再次受到相同抗原刺激后发生的一种以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的异常免疫应答。由此引起的疾病为超敏反应性疾病。
9、皮内试验(intracutaneous test): 是我国目前应用最广泛的一种试验方法。将试验用变应原提