糖鞘脂Gb3配体结构与配体胞内运输关系.pdf

要摘糖鞘脂�������������广泛存在于哺乳动物细胞膜表面,在细胞的生尿毒症密切相关。志贺***��怯闪〖仓竞鼐�����两部分构成。研究表明,在哺乳动物细胞内,��与��岷虾螅��稍缙诎�谔澹�循环胞内体直接到达高尔基体,再逆向运输至内质网,而不经过晚期胞内体的降解环境。然而另有研究表明,将荧光标记的��尤胂赴�螅�糠諫�也到达高尔基体。但现有的一些证据显示,��推渑涮錝��赡懿扇〔煌�陌�掏揪叮合赴�逃械腉�途本文以��细胞为实验材料,从两个方面研究了配体结构与配体胞吞途径的关系。了野生型配体和突变配体的胞内运输。第二部分比较了不同配体�烊慌涮錝��腿�工配体��固����的胞吞途径,从而阐明��在细胞内的运输路径是否由��在结合能力上,��最强,��居中,��最弱。以质粒���为模板,通过重���用噶�佣ㄏ蚩寺∧康幕�颉V刈橹柿W;�蟪Ω司���,阳性菌落经小提质粒的酶切鉴定正确后,进行基因测序。测序结果与实验设计测序正确的菌种以及表达��的菌种经扩大培养后,在�℃条件下诱导重组蛋白和野生型蛋白的表达。用渗透休克法提取周质蛋白,��甈��缬鞠允居醒粜缘鞍滋�带出现。将周质提取物先通过�甋�����离子交换柱初步纯化,再用���转运情况。结果显示,经�。�嘌���馑闹值鞍锥寄芫奂�谠缙诎�谔澹��钒�谔濉���馑闹值鞍锥寄馨邢蚋叨��濉5�遣糠諷��殉氏帜谥释�ㄎ惶��琒��氏值湫偷哪谥释�ㄎ惶卣鳎��槐渑涮寤苟ㄎ挥诟叨��体,且似乎��最慢。经���嘌���琒��哪谥释�ㄎ惶卣鞣浅5湫停��槐�长、分化、识别、信号传导等方面起着非常重要的作用。细胞膜上的��侵竞馗司��素������琒��氖芴澹�胫竞馗司��鸬闹卸拘愿剐骸⒊鲅P越岢ρ住⑷苎P�������产生的一种重要的致病毒力因子,由具有酶活性的�腔����褪芴褰岷献饔玫腂亚基���径和由配体��诱导产生的��途径。第一部分,通过分子克隆构建了三个与��岷锨咳醪坏鹊腟��槐涮澹�芯坎⒈冉�诱导产生的。在第一部分,首先总结文献确定构建三个突变体,分别为��、��和��,。叠延伸诱变��┰鐾槐涮宓膃���巍M槐涮錯��驮靥錺���直鹩肧��杆�校�缓笥肨�相符。强阴离子交换剂进一步纯化。��甈��缬炯��康牡鞍椎拇慷��%,����检测纯蛋白为预期的目的蛋白。最后用考马斯亮蓝法定量目的蛋白。以��细胞为研究体系,免疫荧光检测并比较了��、��、��、��的经���嘌�征,暗示着与受体结合能力的减弱影响了从早期胞内体/循环胞内体到高尔基体的运输速度。经�℃培养����
体配体仍旧定位于高尔基体。进一步的研究表明突变体无法到达内质网,在到达高尔基自然界存在的��涮澹�鳪�抗体�.�可以看成是人工合成的配体,两种配体都结内,与��的逆向运输路径是完全不一致的。说明��在细胞内的运输路径是��体后降解。表明与受体的结合强弱影响了到内质网的运输,即��的胞内运输依赖于��.��春衔锏奈榷ㄗ饔谩�在第二部分,比较了��和��固����贖��赴�诘陌�掏揪丁����合��墓烟遣糠帧8�萁峁�珿�抗体�.�能结合于细胞膜表面,但无法进入细胞诱导产生的,而并非利用了细胞内固有的��T送揪丁�关键词:糖鞘脂��恢竞囟舅谺亚基;配体结构;胞内运输;突变体;内质网;高尔基体�
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