蛋白质的修饰和表达03.ppt

第三章蛋白质的修饰和表达
3/18/2018
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主要内容
第一节蛋白质修饰的化学途径(P88-94 自学)
第二节蛋白质改造的分子生物学途径
第三节重组蛋白质的表达
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第二节蛋白质改造的分子生物学途径
基因突变技术是通过在基因水平上对其编码的蛋白质分子进行改造,在其表达后用来研究蛋白质结构功能的一种方法。
分类:
位点特异性突变
基因突变技术
(按特点划分) 随机突变
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1)通过寡核苷酸介导的基因突变
位点特异性突变 2)盒式突变或片段取代突变
3)以双链DNA为模板,利用PCR
技术进行的基因突变
可以这样说,PCR技术的出现为基因的突变,基因的剪接开辟了一条极其有效、极其快捷的道路。当然无论哪种方法都可以在为蛋白质编码的基因序列上产生插入、缺失、取代等突变。
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定义:专一性位点突变又称特异性位点突变。这类突变都是在含有突变序列的寡核苷引物介导下进行的,因此又称为寡核苷酸介导的位点特异性突变。这种突变的方法从问世至今不断更新,特别是PCR技术出现后变得更高效。
(1) 寡核苷酸介导的基因突变中的各种因素
(2) 几种寡核苷酸介导的基因突变方法
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②核甘酸突变引物的设计和选择
必须与模板链上的目标DNA序列有必要的互补区
足够长,以便与目标DNA序列退火
突变引物应尽可能避免形成稳定的二级结构的回文序列、重复序列或自身互补序列
突变引物要特异,不能与目标DNA中突变位置以外的DNA形成非特异性的杂交混合体
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例子:将NCBI数据库中的MADS基因编码蛋白质的“KKACSDSSA”中的C(Cys)定点突变为A(Arg)。
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