促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究.doc

促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究.doc促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究
【摘要】目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) 的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法通过梯度分离获得成年大鼠MSCs ,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE) 、神经丝蛋白(NF) 、胶质纤维酸性蛋白( GFAP) 和神经巢蛋白(Nestin) 的表达情况,流式细胞仪检测分析诱导率。结果 BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)所获得的神经元样细胞诱导率高(49. 7%)。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。?
【关键词】骨髓;间充质干细胞;诱导分化;神经元样细胞??

【Abstract】 Objective To explore the means of transdifferentiation of bone marroesenchymal stem cells(BMSC) of adult rat to neuronlike cells in vitro. Methods BMSCs adult rats using gradient cent rifugation and subculture differentiation munocytochemistry analysis a examination neuron specific enolase(NSE)、neurofilament protein (NF) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) and floetry analysis examination ed inductivity. Results The BMSC could be transdifferentiated to neuronlike cells arroal stem cells; Induction differentiation; Neuronlike cells

探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(bone marroesenchymal stem cells,BMSCs) 的体外分离、纯化、扩增、传代培养及定向诱导分化为神经元样细胞的更好方法,为BMSCs 在神经系统疾病的临床应用提供理论依据和技术方法。?
1 材料与方法?
材料和试剂成年E) 、硫代甘油、叔丁基对羟基茴香醚(BHA) 、二***亚砜(DMSO , Sigma 公司) , 兔抗大鼠神经元烯醇化酶(NSE Maxim 公司)多克隆抗体、兔抗大鼠神经丝蛋白(NF2 Maxim公司) 多克隆抗体和胶质纤维酸性蛋白( GFAP Maxim公司) 多克隆抗体及兔抗大鼠神经巢蛋白(Nestin , Pharmingen 公司)多克隆抗体。?
原代及传代培养取成年的SCs 的低密度层到MSCGM(骨髓间充质干细胞专用培养基) 中,在37 ℃,体积分数为5 %CO2 ,95 %湿度常规培养。细胞达90%融合后传代。?
定向诱导MSCs 分化
取3~5 代的BMSCs ×10