特殊染色.doc

字号:大中小
第一节结缔组织和肌纤维染色
Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)
用途:VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。
原理:酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力,结果胶原纤维被酸性复红染成红色,肌肉被苦味酸染成黄色。此方法是一种优良的传统方法。
固定:10%福尔马林
切片:4-6微米
试剂:
Weigert铁苏木精液:
A液:苏木精1g,无水酒精100 ml。一般配制后需要数周或数月自然氧化,成熟后使用。
B液:29%三***化铁水溶液4 ml,蒸馏水95 ml,盐酸1 ml。
两液分别配制,临用时A、B液等量混合,过滤后使用。24h后失去染色能力。
Van Gieson液:
1%酸性复红水溶液    10 ml
苦味酸饱和水溶液    90 ml
临用时1:9混合过虑后使用。
 
Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤:
1.  石蜡切片脱蜡至水。
2.  Weigert苏木精液5-10 min。
3.  充分水洗。
4.  Van Gieson液1-5 min。
5.  95%酒精迅速分化数秒。
6.  无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果:胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。
体会与说明:由于酸性复红退色较快,染色结果不能长期保存,一般只能保存3~6个月。
 
二 Masson三色法
试剂:
Regaud 氏苏木精:苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml。
将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。
Masson丽春红酸性复红液: ,,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml。
%冰醋酸水溶液: ml,蒸馏水100 ml。
1%磷钼酸水溶液:磷钼酸1g,蒸馏水100 ml。
苯***蓝水溶液:苯***蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml。
1%光绿水溶液:光绿 1g,蒸馏水100 ml。
Masson三色法步骤
1.  石蜡切片脱蜡至水。
2.  铬化处理或去***盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)。
3.  依次自来水和蒸馏水洗。
4.  用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。
5.  充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。
6.  蒸馏水洗。
7.  用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。
8.  以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
9.  1%磷钼酸水溶液分化3-5min。
10.              不经水洗,直接用苯***蓝或光绿液染5min。
11.              %冰醋酸水溶液浸洗片刻。
12.              95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。
体会与说明:
。
,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。
%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳。
、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。
 
弹力纤维染色
Schmorl染色法
石炭酸-品红液:碱性品红2g,无水酒精50ml,熔化石炭酸25ml,在37℃温箱过夜,冷后过滤。
Weigert间苯二酚-品红液:碱性品红1g,间苯二酚(Resorcin)晶体2g,蒸馏水100ml。
       在锥形烧瓶内煮沸,加29%三***-5mine。冷后过滤,烘干滤纸及沉淀,放入烧瓶并加95%酒精100ml在水浴加温至染料全溶解,待冷却后过滤,并补足因加热蒸发的酒精至100ml。最后加浓盐酸2ml摇匀备用。
弹力纤维Schmorl染色法步骤
1.  石蜡切片脱蜡至水。
2.  石炭酸-品红液37℃染1h,或室温24h。
3.  70%酒精漂洗。
4.  Weigert间苯二酚-品红液染色20-30min。
5.  无水酒精分色约1/2h,%盐酸的95%酒精分色。
6.  流水冲洗后换蒸馏水漂洗。
7.  常规苏木精染核5-10min。
8.  水洗。
9.  Van Gieson液复染3-5min。
10.              蒸馏水洗。
11.              酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:弹力纤维蓝黑色,胶原纤维红色,肌纤维黄色,细胞核蓝色
 
弹力和胶原纤维染色法
试剂:
维多