高效液相制备色谱的设备进展及应用
2018/4/19
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目录
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液体制备色谱
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展望
2
高效液相制备色谱柱设备
应用
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1
液相色谱是将分离填料填装在色谱柱
内,以液体流动相进行洗脱,利用药
物不同活性成分与填料相互作用力
的差异进行分离。
输液系统
进样系统
分离系统
检测系统
数据处理系统
高压输液泵
在线脱气装置
概念
基本装置
液体制备色谱
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分类
两种模式,一种是在柱上方加压,另一种是在柱下方减压。在低压制备色谱中使用的是颗粒较大的填料,因此其分辨率是有限的。
利用恒流泵抽送流动相,带着样品流经色谱柱,实现对样品的分离。其色谱柱一般是由耐压的强化玻璃制成,填料颗粒大小比低压制备色谱所用填料小,分离效率更高。
高压液相色谱
低压制备色谱
中压制备色谱
利用更细的高效填料进行分离的,具有高柱效、高流速、分离时间短的特点。与经典液相色谱相比高效液相色谱有很大不同。
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HPLC与经典液相色谱的不同
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制备型液相色谱
制备型液相色谱
输液泵
进样系统
色谱柱系统
检测器
馏分收集器
数据采集与处理系统
柱结构
柱尺寸
柱型
对填装的要求
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目的不同
流速不同
进样模式不同
上样量不同
色谱柱不同
理论基础不同
检测池不同
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输液泵
进样系统
色谱柱系统
检测器
馏分收集器
数据采集与处理系统
色谱柱是核心部件,色谱填料的填装是其操作的关键技术。制备型HPLC由于采用细的填料、高压操作,所以色谱柱多用不锈钢制作。
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制备HPLC的色谱柱系统
在此处主要提出色谱柱系统,因为相对于分析型色谱,制备色谱的核心就是色谱柱。为提供既稳定又高效的色谱柱,并用小尺寸颗粒进行填充,最常用也是最易实现的效果较为理想的是动态轴向压缩柱(DACTM)技术。DAC技术为使用者提供了用任一种填料自己装填色谱柱、方便快速地调整柱长度的可能性。在制备型HPLC中,色谱柱的内径可在100~500mm之间。一般增大色谱柱的直径意味着可以承载更多的样品,从而增加产量。增加色谱柱的长度则意味着可加入的样品量和分辨率的增大,但同时也增加了柱压。研究表明对于难分离物系,可以采用直径较小的色谱填料,以提高分离效率,但在分离度可以满足分离要求的前提下,使用较大直径的色谱填料将更为有利。色谱填料的填装是其操作的关键技术。制备型HPLC由于采用细的填料、高压操作,所以色谱柱多用不锈钢制作。
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制备HPLC的色谱柱系统
柱尺寸:
柱短、内径大、呈圆饼状
在制备型HPLC分离过程中,在满足分离度要求的前提下,可以采用增加制备
柱内径的方法提高制备量。
柱型:
锥型柱与圆柱型柱
锥型柱优于圆柱型柱,锥型柱的样品容量约为圆柱型柱的2倍,柱效比圆柱型柱高36%,色谱流出曲线峰值高于圆柱型柱12%。
柱结构:
空管柱、轴向压缩柱和径向压缩柱
对填装的要求:
填料的种类、装填技术
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