第二章 基因工程 工具酶.ppt

第二章基因工程工具酶
分类:
限制性内切酶(Restriction Endonuclease)
RNaseA
RNaseT1
RNaseH
DNase Ⅰ
S1
核酸外切酶(Exonuclease)
(内切酶)
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大肠杆菌DNA聚合酶(DNA PolⅠ)
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段
(Klenow Fragment Ⅰ)
(Taq酶)
DNA连接酶( Ligase )
反转录酶(Reverse Transcriptase)
小牛肠碱性磷酸酶(CIP)
(BAP )
T4噬菌体多核苷酸激酶
(T4 Phage Polynucleotide Kinase)
鼠源
禽源
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(一)限制性核酸内切酶的发现
(二)限制性核酸内切酶的分类
(三)限制性核酸内切酶的命名
(四) II型限制性核酸内切酶的基本特性
(五)限制性核酸内切酶的消化反应条件
第一节限制性核酸内切酶
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由寄主控制的限制和修饰现象---20世纪60年代,Linn和Arber 发现
(B)
(K)
大肠杆菌B
大肠杆菌K
EOP=1
EOP=1
EOP=10 -4
EOP=10 - 4
EOP 成斑率
efficiency of plating
外源DNA
自身DNA
(一)限制性核酸内切酶的发现
限制和修饰现象
(在原核生物,少数霉菌和蓝藻中。)
在核酸分子链的内部制造切口
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B含有EcoB核酸酶和EcoB***化酶
当λ(k),由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列,被降解掉。 B的DNA中虽然也存在这种特异序列,但可在EcoB***化酶的作用下,催化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)将***转移给限制酶识别序列的特定碱基,使之***化。 EcoB核酸酶不能识别已***化的序列。
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限制—修饰的酶学系统
(B)
(B)
酶切位点
不被修饰
噬菌体DNA
被切割
酶切位点
被修饰
基因组DNA
不被切割
细菌的限制和修饰系统是一种自我保护作用。
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1962年,。1968年发现Ⅰ型核酸内切酶;
1968年,美国的H. O. Smith发现Ⅱ型核酸内切酶;
1970年,美国的O. Nathans用Ⅱ型核酸内切酶制备了肿瘤基因。
1978年三人共获诺贝尔生理与医学奖。
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从此,相关研究展开。目前已纯化出3000种限制性内切酶中,其中有30%是在NEB发现的。
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