基因工程的基本操作程序：课件一.ppt

基因工程的基本操作程序
目的基因的获取
基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测与鉴定
目的基因主要是指______________________
编码蛋白质的结构基因
目的基因的获取
供体生物细胞
取出DNA
用限制酶剪去多余部分
目的基因
即:将需要的基因从供体生物细胞内提取出来
目前被广泛提取使用的目的基因有:苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因(抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。
1)从基因文库中获取目的基因
?
?
种类:
基因组文库:
部分基因文库(cDNA文库):
获得目的基因的方法
2)
2)利用PCR技术扩增目的基因
3)人工合成
含有一种生物的全部基因
含有一种生物的部分基因
根据基因的有关信息:如基因的转录产物mRNA
PCR技术—聚合酶链式反应
原理:
前提:
条件:
PCR扩增仪
DNA双链复制的基本原理
一段已知目的基因的核苷酸序列
四种脱氧核苷酸
一对引物
热稳定DNA聚合酶(Taq酶)
DNA的两条链为模板
温度控制
5/
3/
G—G
T—C
3/
5/
G—A
C—C
5/
3/
引物Ⅱ
G—G
变性
复性
延伸
,解链;
;
。
5/
3/
A—G
引物Ⅰ
利用PCR技术扩增目的基因
PCR技术扩增过程
a、DNA变性(90℃-95℃):双链DNA模板
在热作用下, 断裂,形成_______
b、复性(55℃-60℃):系统温度降低,引物
与DNA模板结合,形成局部________。
c、延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下,从
引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补
的________。
氢键
单链DNA
双链
DNA链
目的基因的mRNA
单链DNA (cDNA)
双链DNA
(即目的基因)
反转录
合成
1)反转录法:
以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需的基因。
蛋白质的氨基酸序列
mRNA的核苷酸序列
结构基因的核苷酸序列
目的基因
推测
推测
化学合成
2)根据已知的氨基酸序列合成DNA法: