第7章 酶学分析技术PPT幻灯片.ppt

第一节酶活性测定的基本知识
酶是一种生物催化剂,其化学本质是蛋白质。它在体内含量极微,每ml仅为p***平,要直接测定其绝对量是十分困难的,目前是根据其催化反应速度来定量,称为相对定量法。
第七章酶学分析技术
(一)酶活性的概念酶活性是指在规定条件下,单位时间内底物的减少量或产物的生成量。即酶反应的速度。
如果在酶反应过程中测得的产物[P]或底物[S]的变化量对时间作曲线可得到酶促反应时间进行曲线。
一、酶活性的概念和单位
反应最初阶段,[S]过量,原始浓度很大。[P]或[S]的变化量随反应时间而线性地增减,即单位时间内[P]或[S]的变化量或反应速度是恒定的,此阶段称为零级反应期。
一般情况下,产物和底物的变化量是一致的,但测定产物的生成要比测定底物的减少为好,因产物是从无到有,只要测定方法足够灵敏,准确度很高。
(二)酶活性单位酶活性大小通常以单位来表示,单位是一个人为规定的标准,是指在规定条件下,使酶反应达到某一速度所需要的酶量,酶单位有三种表示方式。
1. 惯用单位 60年代前,各种酶活力的表示法和酶单位定义没有统一标准,一般由方法的设计者自行规定在某一特定条件下生成一定量的产物为一个单位。
这样,同一种酶由于测定方法不同,可有不同单位定义,如ALT的比色测定法有金氏法、穆氏法、赖氏法,三种方法原理相同,但单位的定义不同,正常参考范围也不同。
缺点:
(1)由惯用单位换等成IU较麻烦。
(2)对分子量不明的底物无法计算其摩尔浓度。
(3)同一种酶用不同的测定方法,换算成国际单位后仍不相同。
3. Katal单位为了与法定计量单位(SI)接轨,1972年国际酶学委员会又提出的一种新单位,是指在最适条件下,每秒使1mol底物发生变化的酶量。
1 Kat=60×106IU
1 nKat=
1 IU=
(三)酶的比活性
是指单位质量的蛋白质所具有某种的活性,用酶活性单位/mg蛋白质来表示,比活性是衡量酶纯度的一个指标,比活性高,表示酶制剂中杂蛋白的含量少,酶纯度高。
酶活性单位的计算,实际上就是计算单位时间内底物或产物的变化量。计算公式
二、酶活性单位的计算