酶分析法 PPT幻灯片.ppt

酶分析法_PPT幻灯片第二章酶分析法
第一节酶活力测定法
第二节酶法分析
酶分析法的两种类型
酶活力测定:以酶为分析对象,也就是根据需要对样品进行酶含量或活力的测定。
酶法分析:以酶作为分析工具或分析试剂,用以测定样品中用一般化学方法难以检测的物质,这些物质可以是酶的底物,也可以是酶的抑制剂或酶的辅助因子。
酶活力测定法
一、酶活力
二、酶活力的测定
张晓静
一、酶活力
酶活力是指酶催化某一化学反应的能力,酶活力的大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速率来表示,两者呈线性关系。酶反应速率越大,酶活力越高,反之越低。
酶催化的反应速率可用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示。在实际酶活性测定中一般以测定产物的增加量为准。
酶活力的测定就是测定酶促反应的初速率。

张晓静
一、酶活力

酶的比活力代表酶的纯度,通常用下式表示:
酶比活力=[ 酶活力单位数(U) / 蛋白质量(mg) ]
有时也采用每克(g)酶制剂或每毫升(mL)酶制剂含有多少个活力单位来表示。
比活力的大小可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。比活力是酶学研究及生产中经常使用的指标。
张晓静
二、酶活力的测定

要求酶活力的测定方法:快速、简便、准确。
酶活力测定均包括两个阶段:首先要在一定的条件下,酶与其作用底物反应一段时间,然后再测定反应液中底物或产物变化的量。
张晓静
二、酶活力的测定
酶活力
的测定步骤
①底物
②反应条件
③反应时间
④底物或产物
变化量
选择底物
配制底物溶液
确定酶促反应条件:pH、温度等
准确计时并终止反应
运用各种检测技术,快速、简便、准确的测定变化量
张晓静
二、酶活力的测定
①底物:根据酶的专一性,选择适宜的底物,并配制成一定浓度的底物溶液。要求所使用的底物均匀一致,达到一定的纯度。有些底物溶液要求新鲜配制,有些则可预先配制后置冰箱保存备用。
②反应条件:据资料或试验结果,确定酶促反应的温度、pH等条件。温度可选在室温(25℃)、体温(37℃)、酶促反应最适温度或其他选用的温度,一般在恒温装置内进行。pH应是酶促反应的最适pH,采用一定浓度和一定pH的缓冲溶液来保持。反应条件一经确定,在反应过程中应尽量保持恒定不变。有些酶促反应要求激活剂等其他条件,应适量添加。
张晓静