临床样本的采集、运输和保存及核酸提取 PPT幻灯片.ppt

临床样本的采集、运输和保存及核酸提取_PPT幻灯片临床标本的采集、处理、运送与保存及DNA/RNA提取
研究背景
样本的采集、处理
样本的保存
样本的运输
DNA的提取
RNA的提取
研究背景
一、样本的采集、处理、保存及运输
临床标本的正确采集、运送、保存的重要性
临床检验的质量保证关键性环节
解决涉及实验室检验的医患纠纷的方法之一
(一)、样本的采集
地贫检测样品采集:
外周血: ≥5mL
脐带血: ~1mL
羊水:20~30mL
绒毛:≥15mg
唾液
组织
全血
以全血作为待测标本时,必须注意抗凝剂的选择,一般使用EDTA-Na2或枸椽酸钠,不可使用肝素
全血样本如用于DNA提取检测,可4℃下短期保存,如用于RNA检测,则应在取血后,尽快提取RNA
血清(浆)
DNA测定,可按照一般的血清标本处理程序,对测定影响不大
RNA测定,标本的获取和保存方式对测定结果,可能有决定性影响。最好是使用EDTA抗凝(严禁使用肝素)全血标本,抗凝后6小时内分离血浆,如使用血清标本,则需尽快(2小时内)分离血清,标本的短期(1~2周)保存可在-20℃下,较长期保存应在-70℃下
肝素的作用机理
肝素对MLV逆转录酶和TAQ DNA聚合酶均很强的抑制作用,如果临床标本为肝素抗凝,则在核酸纯化过程中,标本中的肝素可结合于DNA和RNA上
对标本进行煮沸、凝胶过滤、酸碱处理后凝胶过滤、反复乙醇沉淀等均不能去除肝素的这种干扰作用
,即可100%的抑制酶活性
在标本中加入肝素酶I 或Ⅱ1~3 U/μg核酸在于5 mM Tris , 1 mM CaCl2, 40 U RNasin 25 ℃下作用2小时可去除肝素的抑制作用
(二)、样本的运送
样本一经采集,则应尽可能快的送至检测实验室
样本中如加入了适当的稳定剂,如用于DNA测定的EDTA抗凝血等,则可在室温下运送或邮寄
建议:将全血标本或DNA样本用冰袋加泡沫盒快递运送。如需提取RNA的样本需预处理后加lml Trizol在低温运送