第三章 核酸的分离与检测.pptx

从哪儿提取(Where)?
怎么提取(How)?
提到什么程度(What)?
会出现什么问题(Questions)?如何解决(Solution)?
核酸提取的原则和基本要求
核酸提取的一般过程
关键试剂的作用
核酸的部分特征
核酸提取的常用方法
核酸提取经典案例
核酸提取的注意事项
核酸提取出现的问题及对策
核酸提取的相关说明
主要内容
核酸提取的原则和基本要求
Principle and steps
Principle
保持核酸的完整性;
提高核酸的质量(纯度和浓度)。
Requirements for purification
不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;
其他事物大分子(Pr、sugar and lipid)
其他核酸污染
核酸提取的一般过程
Principle and steps
Steps
样品准备(取材)
破细胞(物理法、化学法、酶法);
除杂质(蛋白质、脂类、糖类和不需要的核酸);
沉淀提纯

-内容物释放
、纯化
,并去除杂质
 

破碎细胞-方法
机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;
化学试剂法:用SDS或CTAB处理细胞; 
酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。
破碎细胞-来源
动物:小牛胸腺۰动物肝脏、血液和肌肉组织等۰鱼类精子;
植物:种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物:谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%(培养过夜)。
Note: 从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易,多数病毒DNA 分子量较小,提取时易保持其结构完整性。 从高等动植物中提取DNA难度大一些。因分子量较大,易被机械张力剪断。
破碎细胞(来源-方法)
微生物:溶菌酶、SDS裂解。
高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。
酶法:蛋白酶,如胰蛋白酶,
冰冻法:反复冻融或液氮冻后组织捣碎。
动物:液氮处理后用匀浆器破碎。
细胞器DNA:首先纯化细胞器。

以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂
抽提核酸除去杂质
、核糖体、病毒的核蛋白与其它成分分离



How to remove ?