主要内容
Real Time PCR基础知识
1
2
Real Time PCR实验方法
3
Real Time PCR解析方法
4
Real Time PCR应用实例
实时荧光定量PCR介绍
1
May 23, 2018
Real Time PCR基础知识
1. Real Time PCR的用途及原理
2. Real Time PCR的检测方法
Real Time PCR基础知识
1
实时荧光定量PCR介绍
2
May 23, 2018
Real Time PCR的用途
Real Time PCR用途
定性分析
定量分析
病毒及病原菌定量分析
导入基因拷贝数解析
GMO定量检测
差异显示结果验证
基因芯片结果验证
siRNA效果确认
mRNA表达量分析
病毒及病原菌检测
物种鉴定
基因分型
绝对定量
相对定量
实时荧光定量PCR介绍
3
May 23, 2018
Real Time PCR的原理
激发光
发射光
使用Real Time PCR扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。
Real Time PCR
Ct值
实时荧光定量PCR介绍
4
May 23, 2018
Real Time PCR的原理
同一个样品重复96次PCR的扩增曲线
Ct值
实时荧光定量PCR介绍
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May 23, 2018
Real Time PCR扩增过程中,每个反应管内的荧光信号值
达到设定的阈值时所经历的循环数。
( C-代表Cycle,t-代表threshold)
Ct值概念
阈值:在扩增曲线的指数增长区域内适当位置上设定的
荧光检出界限。
Real Time PCR中的概念
实时荧光定量PCR介绍
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May 23, 2018
在PCR反应体系中加入荧光物质,并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程,
最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。
Real Time PCR的原理
实时荧光定量PCR介绍
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May 23, 2018
生产厂商
仪器名称
TaKaRa公司
Thermal Cycler Dice TP800
Applied Biosystems公司
ABI PRISM 7700、7000、7300、7900HT、 7500Fast
Roche公司
LightCycler® 、LightCycler® 480
Cepheid公司
Smart Cycler、Smart Cycler II、Smart Cycler ® TD
Bio-Rad公司
iCycler iQ、iQ5 Real-Time PCR Detection System
Corbett Research公司
Rotor-gene2000、Rotor-gene3000 、 Rotor-gene6000
MJ Research公司
Opticon、MJ Mini Cycler、 MiniOpticon
Stratagene公司
Mx4000®、Mx3000P® 、Mx3005PTM
杭州博日
LINE-GENE FQD-33A、LINE-GENE FQD-66A
Real Time PCR检测系统--简介
实时荧光定量PCR介绍
May 23, 2018
LightCycler® 480
Rotor-gene6000
MiniOpticon
Mx3005PTM
LINE-GENE FQD-66A
ABI PRISM 7500
iQ5 Real-Time PCR Detection System
TaKaRa TP800
实时荧光定量PCR介绍
May 23, 2018
各公司Real Time PCR检测系统比较
仪器名称
反应孔数
反应孔间
独立性
检出通道
升降温速度
Tube
ROX荧光
校正功能
TaKaRa Dice TP800
96
无
2-4
快
无
ABI7000
96
无
4
快、慢两种
8联管、
专用Cap
有
ABI7500 Fast
5
快
Light
32
无
6
快
专用毛细玻璃管
无
Light Cycler 480
96 or 384
5
快
专用板
Smart Cycler
16 (6×16 )
有
4
快
专用、塑料+石英
无
Rotor-Gene 3000
36 ()
72 ()
无
4
慢
,
0.
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