2014年一致学历 临床医学 真题.doc

ELISA 的原理技术及其
在药物分析领域的应用
天津中医药大学中医药研究院
崔元璐研究员
1. ELISA的原理
2. ELISA的类型
3. 试剂准备:免疫吸附剂
结合物
酶底物的准备
4. 对照设定
5. 标本的采取和保存
6. 结果判断
第一部分:ELISA的原理与技术
ELISA是一种免疫测定(immunoassay,IA) 。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物、能够被激发出荧光或化学发光,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。
1. ELISA的原理
酶免疫测定类型
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay),简称ELISA。
酶免疫技术
酶免疫组化
酶免疫测定
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
固相酶免疫测定
液相酶免疫测定
抗原抗体反应
可逆性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力(affinity),可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。
特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系,具有高度的特异性。

测定某一特定的物质,而不需先分离待检物。
最适比例
敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml
免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿
标记的免疫检测敏感度可提高数千倍,达ng/ml水平
例如,乙肝表面抗原(HBsAg),。
2 ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:
(1)固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);
(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);
(3)酶反应的底物。
可设计出各种不同类型的检测方法。